检索历史 清除

摘要背景：早发性卵巢功能不全(POI)是指女性40岁之前卵巢功能衰退，其特征是闭经伴有低雌激素和高促性腺激素，发病率约为1%-3%，近年来早发性卵巢功能不全发病率逐渐年轻化并呈上升趋势，根据流行病学调查显示，我国早发性卵巢功能不全的发病率相对较高。早发性卵巢功能不全的病因复杂多样，国内外相关文献报道较少，参考价值有限，临床上对于早发性卵巢功能不全发病机制的研究还未得出较为确切的结论，可能与遗传因素、自身免疫性疾病、医源性因素、环境因素、心理因素、酶学及代谢障碍、卵泡闭锁、线粒体损伤等有关，其中遗传因素占20%-25%，包括染色体异常、基因突变、遗传多态性等，而最常见的遗传因素是X染色体致病基因，如DACH2、DIAPH2、FMR1、POF1B等，更多的潜在病因及发病机制仍在探索中。<br>　　目的：鉴定早发性卵巢功能不全的遗传因素和筛选生物标志物。<br>　　方法：第一部分鉴定遗传因素：收集早发性卵巢功能不全患者的外周血标本，从群体水平筛选早发性卵巢功能不全的致病突变，通过全外显子测序鉴定到一个已知致病突变POF1B(c.932A＞C/p.K311T)和新发现突变MLH1(c.1917dup/p.P640Tfs5)，进一步运用Sanger测序确认新突变，运用ExPASy、Swiss-Model、PyMol等软件对新突变MLH1(c.1917dup/p.P640Tfs5)进行功能预测并确定其致病性。第二部分筛选生物标志物：运用ELISA检测早发性卵巢功能不全患者的外周血血清中LIPIN3的表达水平，检测结果同GEO公共数据库相符，构建卵巢颗粒细胞模型，进一步运用WB、CCK8及RNA-seq进行检测分析。<br>　　结果：通过全外显子测序技术与遗传学分析发现2例患者携带致病突变，1例患者携带已知致病突变POF1B(c.932A＞C/p.K311T)，1例患者携带新发现致病突变MLH1(c.1917dup/p.P640Tfs5)。运用蛋白模型预测新发现致病突变MLH1(c.1917dup/p.P6 40Tfs5)的亲－疏水性、结构、电荷均发生了改变。通过ELISA检测发现在早发性卵巢功能不全患者外周血血清中LIPIN3表达降低，该结果同GEO公共数据库筛选结果相符合，进一步运用WB和CCK8在构建的卵巢颗粒细胞模型中检测发现激活的Caspase3增多和细胞活力降低，运用RNA-seq检测线粒体标志分子MFN2表达降低，FIS1表达增高，同WB验证结果相符合。<br>　　结论：本研究通过全外显子测序鉴定到一个已知致病突变POF1B(c.932A＞C/p.K311T)，一个新发现致病突变MLH1(c.1917dup/p.P640Tfs5)，进一步扩大了MLH1基因突变谱，可能有利于早发性卵巢功能不全的病因学研究。利用早发性卵巢功能不全患者外周血血清以及细胞模型初步揭示了LIPIN3分子表达降低可能作为早发性卵巢功能不全的潜在生物标志物分子，从而可能对早发性卵巢功能不全的诊断提供充足的理论依据和潜在的诊断标志物。