检索历史 清除

摘要目的：研究泛素特异性蛋白酶 44（ubiquitin specific protease 44, USP44）在肝癌中的表达水平，USP44与肝癌病理分期及预后的关系，并研究其对肿瘤细胞生物学功能的作用。<br>　　方法：利用临床组织标本进行实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR, qRT-PCR）实验，分析 40 例肝癌组织及其配对的癌旁组织中 USP44 mRNA 的表达水平，结合患者临床病理特征及qRT-PCR数据进行相关性分析和生存分析。检测USP44在肝癌细胞株中表达水平，使用慢病毒构建过表达USP44基因的HepG2和PLC5细胞株，通过qRT-PCR实验和蛋白质印迹实验分别检验USP44在肝癌细胞中过表达的效率。进行 Cell Counting Kit-8 细胞增殖实验和细胞克隆形成实验，检测USP44过表达对细胞增殖能力的影响；利用流式细胞仪进行细胞周期检测，检测细胞周期分布的变化。HepG2细胞株转录组测序结果对比分析，探讨差异表达基因及其涉及的分子功能、生物学过程及潜在作用机制等，通过qRT-PCR实验验证转录组测序结果。<br>　　结果：USP44在肝癌组织中的mRNA表达水平显著低于癌旁组织（P=0.0001）。临床病理特征相关性分析发现：USP44表达水平和患者TNM分期相关，晚期（Ⅲ期和Ⅳ期）的肝癌组织的USP44表达量更低（P=0.026）。生存分析发现：USP44低表达水平的肝癌患者总生存时间更短（37.31月比52.68月，P=0.0471），无病生存时间也更短（3.91月比28.20月，P=0.0189）。USP44在肝癌细胞株中存在异常表达，其在HepG2中低表达，在Hep3B中高表达。通过慢病毒技术在HepG2和PLC5细胞中成功过表达USP44，在mRNA和蛋白水平分别成功检测。Cell Counting Kit-8 细胞增殖实验和细胞克隆形成结果显示：USP44 过表达后肝癌细胞的增殖受到明显抑制。细胞周期实验结果显示：USP44过表达后肝癌细胞周期被阻滞在G0/G1期。通过转录组结果分析，研究USP44的下游靶点和它调控肝癌细胞增殖的分子机制，发现了一组与增殖相关的基因簇，包括细胞周期蛋白 D (cyclin D, CCND) 2、细胞周期蛋白 G (cyclin G, CCNG) 2 和染色体结构维持蛋白 3（structural maintenance of chromosomes protein 3, SMC3）。Ingenuity Pathway Analysis 进一步绘制了 USP44 通过调节膜蛋白、受体、酶、转录因子和细胞周期蛋白，参与控制肝癌中细胞增殖、转移和凋亡的基因网络。qRT-PCR验证转录组结果显示：与转录组测序结果一致。<br>　　结论：USP44在肝癌组织中呈低水平表达，与晚期肝癌及肝癌患者较差的生存率相关。过表达USP44能明显抑制肝癌细胞的增殖能力，阻滞细胞周期于 G0/G1 期并抑制肝癌的发生。USP44 可能通过参与Wnt/non-canonical planar cell polarity 信号通路抑制肝癌细胞的异常增殖，后续研究其稳定的底物蛋白将有重要意义。