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摘要目的：<br>　　股骨头坏死（Osteonecrosis of the femoral head，ONFH）是骨科常见的疾病，常伴有股骨头塌陷和骨关节炎。目前，长期或大量应用糖皮质激素已成为ONFH的首要发病机制。国内外对股骨头坏死的研究主要关注于股骨头内部的病变，虽然滑膜病变不是激素性股骨头坏死（steroid-induced osteonecrosis of femoral head，SIONFH）的主要病理表现，但是滑膜病变不可忽视。滑膜是髋关节的重要组成部分，与髋关节退变密切相关。本研究旨在通过转录组测序阐述SIONFH滑膜病变分子机制，筛选其新的靶点，发掘活血通络法（HXTL）干预滑膜病变及滑膜-软骨调控机制，以期为SIONFH的中医药治疗提供了更广阔的思路及辩证依据。<br>　　方法：<br>　　1. 第一部分：基于转录组测序及生物信息学分析探索激素性股骨头坏死滑膜病变的分子机制<br>　　分别收集股骨颈骨折、髋骨关节炎、激素性股骨头坏死滑膜病变组织（各3例）行转录组测序，获取激素性股骨头坏死滑膜病变测序数据。通过生物信息学分析数据筛选核心基因及通路。使用多聚甲醛对滑膜组织进行固定，石蜡包埋切片，分别行Hamp;E染色；免疫组化、实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot，WB）及免疫荧光检测核心差异基因的表达。<br>　　2. 第二部分：活血通络法干预激素性股骨头坏死滑膜病变机制的研究<br>　　分离培养鉴定大鼠成纤维样滑膜细胞（Fibroblast like synoviocytes，FLS）、软骨细胞，然后通过脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）干预构建激素性股骨头坏死滑膜病变成纤维样滑膜细胞（ steroid-induced osteonecrosis of femoral head-Fibroblast like synoviocytes，SIONFH-FLS）模型。CCK-8实验测定最佳HXTL干预浓度。分组干预（Control组、LPS组、LPS+HXTL组），通过MTT评估SIONFH-FLS的增殖情况， Transwell评估成纤维样滑膜细胞迁移情况。通过Transwell将SIONFH-FLS与软骨细胞共培养，取上室的SIONFH-FLS行qRT-PCR、WB、免疫荧光检测核心差异基因在FLS 中的表达，流式细胞术检测下室软骨细胞的凋亡水平。免疫荧光检测Jagged1/CD63在SIONFH-FLS的表达。重组大鼠IFNα蛋白干预分别干预FLS、软骨细胞。<br>　　3. 第三部分：活血通络法通过IRF7/AKT/Jagged1信号轴调控SIONFH-FLS外泌体分泌的机制研究<br>　　提取及鉴定SIONFH-FLS外泌体。分组干预软骨细胞（Control组、外泌体组、外泌体+HXTL组），凋亡流式细胞术检测软骨细胞的凋亡水平。取SIONFH-FLS行qRT-PCR、WB检测AKT、pAKT及Jagged1的表达。<br>　　结果：<br>　　1. 第一部分：基于转录组测序及生物信息学分析探索激素性股骨头坏死滑膜病变的分子机制<br>　　转录组测序和生物信息学分析，我们共鉴定了1001个与SIONFH滑膜病变相关的特征基因，其中654个基因表达上调，347个基因表达下调。功能富集分析显示，激素性股骨头坏死滑膜病变与免疫炎症反应密切相关，细胞外外泌体可能参与这一过程。核心基因筛选发现IRF4和IRF7为激素性股骨头坏死滑膜病变的核心差异基因。实验验证IRF4、IRF7、IFNα在组织标本中表达升高（P＜0.05），具有统计学意义。CDH-11在激素性股骨头坏死滑膜组织中高水平表达，FLS可能是激素性股骨头坏死滑膜病变的靶细胞<br>　　2. 第二部分：活血通络法干预激素性股骨头坏死滑膜病变机制的研究<br>　　与空白组相比SIONFH-FLS增殖及迁移能力显著增强（P＜0.05），HXTL法能抑制其增值及迁移与空白组相比IRF4、IRF7、IFNα在SIONFH-FLS中高水平表达（P＜0.05），具有统计学差异。Transwell共培养实验结果表明，SIONFH-FLS能增加软骨细胞的凋亡率。与空白组相比Jagged1/CD63在SIONFH-FLS高水平表达；与空白组相比经重组大鼠IFNα蛋白干预组FLS的Jagged1/CD63均低水平表达，且IFNα干预不会引起软骨细胞凋亡水平升高。<br>　　3. 第三部分：活血通络法通过IRF7/AKT/Jagged1信号轴调控SIONFH外泌体分泌的机制研究<br>　　SIONFH-FLS外泌体，其呈圆形，大小均匀，具有典型的“碟状”结构。大多数外泌体分布在50-150纳米范围内，浓度为1.6E+9个/毫升，中位粒度为141.9纳米。SIONFH-FLS外泌体干预软骨细胞发现其能引起软骨细胞凋亡率升高，而经HXTL法干预的软骨细胞凋亡率明显下降。与空白组相比pAKT、Jagged1在SIONHF-FLS中高水平表达,而AKT表达水平降低（P＜0.05）。<br>　　结论：<br>　　激素性股骨头坏死滑膜病变与免疫炎症反应密切相关，FLS可能是主要效应细胞，IRF4、IRF7是其潜在的治疗靶基因。SIONFH-FLS增殖及迁移能力显著增强，能提高软骨细胞的凋亡率。HXTL法通过IRF7/AKT/Jagged1信号轴调控SIONFH-FLS外泌体的分泌，从而降低软骨细胞的凋亡率。