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摘要目的：<br>　　（1）从骨组织形态学和组织病理学分析非创伤性股骨头坏死（Osteonecrosis of femoral head, ONFH）坏死区、硬化带及健康区骨组织微观结构及病理表现的区域间差异；<br>　　（2）基于数据非依赖采集（Data-independent Acquisition, DIA）蛋白组学筛选出反映 ONFH 区域间差异的蛋白质组并阐述其功能机制。从分子生物学角度对蛋白组学分析结果进行验证。<br>　　（3）通过动物实验，验证袁氏生脉成骨片对疾病的治疗作用。<br>　　方法：<br>　　（1）收集接受全髋关节置换手术非创伤性 ONFH 患者术后股骨头标本，通过切面大体观察、Micro-CT扫描、病理染色等方法，对ONFH坏死区、硬化带及健康区骨组织进行比较，揭示 ONFH 骨组织微结构及病理表现的区域间差异；<br>　　（2）应用 DIA 蛋白组学技术检测 ONFH 坏死区、硬化带及健康区骨组织蛋白表达，采用差异蛋白分析、加权基因共表达网络分析（Weighted Gene CoExpression Network Analysis, WGCNA）、时间序列分析等手段筛选表现区域间差异、特征及变化特点的蛋白，并进行富集分析。运用 Western-blot（WB）技术检测 ONFH 股骨头坏死区、硬化带及健康区中破骨细胞相关蛋白及抗氧化相关蛋白表达的表达情况。<br>　　（3） 将SD雄性大鼠平均分为空白对照组、模型组和治疗组。模型组及治疗组通过注射咪喹莫特及甲泼尼龙构建激素诱导 ONFH 大鼠模型，其中治疗组大鼠使用袁氏生脉成骨片水溶液持续灌胃 6周。三组大鼠经过 6周饲养后，处死大鼠并取材双侧股骨头。利用 H＆E 染色对比组间股骨头内病理表现差异，验证袁氏生脉成骨片的治疗作用。<br>　　结果：<br>　　（1）成功收集 31 例（33 髋）ONFH患者进行骨微观结构及组织病理学分析。Micro-CT 结果显示硬化带骨小梁厚度（Tb.Th）、数量（Tb.N）及体积分数（BV/TV）较正常区及坏死区明显升高，但其骨表面积骨骼体积比（BS/BV）、骨小梁离散度（Tb.Sp）则较另外两个区域明显降低。而坏死区骨小梁与正常骨组织相比，其仅有小梁数量（Tb.N）的降低具有统计意义，余微观结构参数无差异；病理染色结果表明，坏死区内小梁结构紊乱，骨细胞死亡、细胞核固缩出现空骨陷窝样改变。硬化带则观察到坏死骨组织周围新生活性小梁组织。其周围的修复反应区内存在血管增生、炎性细胞、梭形纤维细胞及纤维结缔组织增生。<br>　　（2） DIA 蛋白组学分析发现与疾病机制相关的蛋白功能主要富集到脂肪代谢、血液凝固、炎症免疫反应、氧化应激、线粒体功能、细胞死亡调控、骨代谢调控。同时 DIA 分析结果也发现了与坏死负相关的关键蛋白 SOD1、MAPK3、AKT1、ATP5B、ACO2、HSPA4 等，与硬化带正相关的关键蛋白DDX3X、SF3B1、NCL、XPO1 等。Western blot 实验结果显示坏死区组织内CTSK、RANKL蛋白表达较硬化带及正常区升高，而SOD1表达降低。<br>　　（3）动物实验表明，相较于对照组，治疗组及模型组大鼠股骨头内出现明显空骨陷窝，小梁结构紊乱，厚度降低等。表明造模成功。而治疗组相较于模型组，其股骨头内小梁变细、小梁间隙增宽、骨陷窝内骨细胞死亡等情况均更轻。<br>　　结论：<br>　　ONFH 区域间差异性不仅表现在影像学上，其坏死区、硬化带、健康区骨组织在骨微观结构、病理表现、蛋白表达等方面均存在显著差异。ONFH 硬化带表现出疾病修复过程为骨小梁结构的新生，促进骨修复是治疗疾病的重要一环（骨合）。ONFH 坏死区异常表达蛋白参与到脂肪代谢、血液凝固、炎症免疫反应、氧化应激、线粒体功能、骨代谢调控等方面。因而改善局部病理微环境（瘀去），在治疗ONFH过程中同样重要。