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摘要组织器官纤维化一直以来都是一个全球性的重大健康问题，它是许多疾病致残、致死的主要原因，其中肺纤维化又是许多慢性炎性疾病的常见病理结果。此外，肺纤维化的诱因很多且初期无法检测，而且随着时间的推移肺纤维化患者的肺功能受损逐渐严重，甚至肺功能丧失直至死亡。但目前为止肺纤维化的机制尚不明确，而且现阶段肺纤维化治疗药物均有一定的局限性。<br>　　当肺组织受到损伤时，在炎性环境的刺激下成纤维细胞会被激活，发生一系列变化比如转变为肌成纤维细胞等；同时这个过程中伴随着肺泡巨噬细胞的活化、聚集以及肌成纤维细胞逐渐释放并累积细胞外基质，从而逐渐导致了肺纤维化。膜蛋白作为细胞间通讯的桥梁，在介导肺泡巨噬细胞活化和成纤维细胞向肌成纤维细胞转变的过程中起着至关重要的作用。因此了解肺纤维化过程中成纤维细胞膜蛋白的组成和功能是至关重要的，这不仅有助于揭示肺纤维化的发病机制，还为开发肺纤维化的治疗方法提供了理论依据。<br>　　本研究通过膜蛋白邻近标记方法 Mem-APEX2，在大量以及少量的人胚肾细胞（HEK293T）、人白血病单核细胞（THP-1）、永生化的骨髓来源巨噬细胞（iBMDM）以及原代的骨髓来源巨噬细胞（BMDM）和肺成纤维细胞中成功标记了细胞膜蛋白，并通过质谱检测到了高比例膜蛋白；说明我们开发的过氧化物酶（APEX2）邻近标记体系具有广泛的普适性，且稳定性良好。我们运用该体系对经典博来霉素诱导的7天和21天小鼠肺纤维化模型的2个时间点进行了分析。我们发现：7天和21天的博来霉素组和生理盐水对照组的膜蛋白标记效率均能达到 80%。通过数据分析，我们发现大部分与肺纤维化有关的信号转导通路在博来霉素刺激 7 天就已经激活了，而产生纤维的生物过程的激活要在刺激21天时间点才能看到。此外我们还发现了肺纤维化的关键标志物电压依赖性阴离子选择性通道蛋白 Vdac1/2，而且 Wnt 通路的核心分子β-连环蛋白（β-catenin）也可以在刺激7天的细胞膜上鉴定到。有趣的是，我们在 7天和 21天博来霉素组均能检测到 NOD样受体信号通路相关的蛋白且数量均高于生理盐水组，提示肺纤维化模型中除了激活已知的 Toll样受体-NF-κB信号通路外，也可能激活NOD样受体信号通路。<br>　　总之我们开发的APEX2膜邻近标记技术对细胞膜蛋白的标记有广泛的普适性，且稳定性良好，对原代细胞膜蛋白的标记效率能达到 80%；而且该方法避免了传统膜蛋白分离纯化的缺点，为原代细胞膜蛋白的研究奠定了基础。肺纤维化作为多种细胞共同调控的复杂系统疾病，了解和分析多种原代细胞的膜蛋白质组学对明确肺纤维化微环境中的细胞相互作用、关键配体-受体对、信号通路在肺纤维化过程中的激活状态具有重要意义。