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摘要非酒精性脂肪肝（NAFLD）是指肝细胞的脂肪变性程度超过5%。目前， NAFLD统计的全球患病率约为25%。NAFLD与代谢综合征如Ⅱ型糖尿病和肥胖等密切相关。作为一种与生活方式相关的疾病，临床上目前还没有治疗NAFLD的特效药物。天然产物大多具有来源广泛和结构类型多样的特点。并且，其药理作用独特，使用安全性高。据报道，很多天然产物均显示出潜在的改善NAFLD的作用。<br>　　连翘叶为木犀科（Oleaceae）植物连翘（Forsythia suspensa (Thunb.) VahL）的叶片。始载于《本草纲目》“茎、叶，苦、平、无毒，治心肺积热”。国内外研究表明，连翘叶的主要化学成分包括萜类、木脂素类、黄酮类和苯乙醇苷类等，这些成分具有抗炎、抑菌、保肝和抗氧化等药理作用。课题组前期研究发现连翘叶经过醇提、大孔树脂富集得到的提取物富含连翘脂素、松脂素、表松脂素、松脂素单甲基醚等木脂素类成分。并且，上述提取物对于高脂饲料（HFD）诱导的NAFLD大鼠症状具有明显改善作用。基于此，本课题进一步研究连翘叶提取物（FA）改善NAFLD大鼠症状作用的潜在机制。研究内容如下：<br>　　（1）利用高分辨液质联用仪对NAFLD大鼠肝脏进行非靶向代谢组学分析，探究了FA干预的大鼠肝脏代谢表型特征。正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）显示：HFD喂养显著改变了大鼠肝脏代谢物组成，主要改变了初级胆汁酸和不饱和脂肪酸的生物合成、牛磺酸和次牛磺酸代谢；干扰了花生四烯酸、β-丙氨酸、嘧啶、和鞘脂代谢；高剂量的连翘叶提取物（HFA）干预后，可以通过调节初级胆汁酸的生物合成、牛磺酸和次牛磺酸代谢和不饱和脂肪酸的生物合成，以及调节嘧啶代谢等，改善NAFLD大鼠的症状。<br>　　（2）通过对“肠-肝轴”相关指标的研究，评价了FA改善NAFLD的药效作用及潜在的机制。利用课题组前期的动物实验样品，对“肠-肝轴”指标进行测定。结果表明：FA干预后能够回调NAFLD大鼠血清和肝脏中的总胆汁酸（TBA）水平；Western Blot结果表明FA能够激活肝脏FXR/SHP/CYP7A1、抑制回肠FXR/FGF15胆汁酸循环通路蛋白的表达水平，以及激活肝脏中FXR介导的FXR/SREBP/ACC脂质代谢通路，从而调节FXR介导的胆汁酸循环以及脂质代谢；回肠组织HE切片分析显示，与模型组相比，给药后回肠结构趋于完整，且呈剂量依赖性；同时， FA能够使回肠组织中的紧密连接蛋白ZO-1和Occludin表达量显著升高。此外，FA能够显著下调NAFLD大鼠炎症因子TNF-α、IL-6以及内毒素结合蛋白LBP的含量，并下调炎症通路TLR4/NF-κB蛋白的表达。综上所述，FA通过影响胆汁酸受体FXR介导的“肠-肝轴”稳态，对NAFLD大鼠起到了改善和治疗作用。<br>　　（3）细胞水平的机制验证。利用油酸刺激肝癌细胞，构建NAFLD体外模型。首先对药效进行评价：尼罗红染色结果表明FA能够减少油酸刺激造成的脂滴堆积；甘油三酯（TG）含量检测表明FA能够减少造模之后细胞的TG水平。通过Western Blot再次验证FA能够激活肝细胞中核受体FXR的表达从而调节脂质代谢通路FXR/SREBP/ACC；添加FXR受体抑制剂GS，证明FA改善NAFLD体外模型脂质堆积依赖于核受体FXR的激活。