摘要皮肤伤口修复中往往面临着氧化应激过度、伤口区域闭合延缓、人体自修复困难的问题。因此,考虑开发一种能够减轻伤口氧化应激、促进伤口加速愈合的具有生物活性的多功能伤口敷料,以解决皮肤伤口修复中的问题。水凝胶支架具有极高的孔隙率和良好的生物相容性,能够通过吸附方式装载纳米颗粒等物质,极大地扩展水凝胶的功能,赋予水凝胶抗炎抗氧化、促进闭合的功能,从而解决伤口修复中面临的问题。<br> 为了满足用于慢性皮肤伤口治疗的水凝胶敷料的所需特性,本论文设计了一种装载有壳聚糖(CHI)/硫酸软骨素(CS)纳米颗粒的具有抗炎、抗氧化、电活性、基因治疗多功能电活性支架——还原氧化石墨烯(pGO)-壳聚糖/丝素蛋白(SF)水凝胶支架。探讨了 pGO-CHI/SF 水凝胶支架的形成的机理;分析表征了 CHI/CS 纳米颗粒的微观形貌、Zeta 电位以及对药物的包封率,并进一步研究了水凝胶支架的机械性能、导电性能和吸水性能;研究了水凝胶支架对细胞的相容性和增殖性的影响;证明了水凝胶支架在体外、体内的抗炎和清除自由基的能力;并且通过皮肤损伤模型评价了水凝胶支架促进皮肤伤口修复的能力。具体研究内容可分为以下几部分:<br> (1)利用聚电解质络合法,制备了 CHI/ CS 多糖纳米颗粒用于负载 miRNA (microRNA,微小 RNA),观察其形貌并测定 Zeta 电位验证了纳米颗粒表面的正电性,测定了纳米颗粒对miRNA的包封率为70%,包封效果优异。<br> (2)制备了具有吸水性、可回复、导电、抗氧化的多功能水凝胶支架。将 pGO掺杂进入 SF与天然高分子 CHI交联而成的水凝胶中,得到 pGO-CHI/SF水凝胶支架材料。pGO-CHI/SF 支架可以快速高效吸附纳米颗粒,并实现纳米颗粒的局部缓慢释放。通过力学性能测试,验证了 pGO-CHI/SF 支架具有良好的压缩性能(压缩强度为22 kPa);通过导电性能测试验证了 pGO-CHI/SF 支架具备导电性(电导率为 13.8 S/m);通过DPPH清除实验验证了pGO-CHI/SF支架具有良好的抗氧化性能。<br> (3)对 miR@pGO-CHI/SF 水凝胶进行细胞毒性、细胞增殖、体外抗氧化、抗炎表征,验证了水凝胶支架的生物相容性以及促细胞增殖、体外抗炎抗氧化等能力。观察与水凝胶支架共培养的成纤维细胞的形态和数量,CCK-8 及活死染色证明了miR@pGO-CHI/SF 具有优良的生物相容性,并且水凝胶支架所负载的 miRNA-21-5p可以有效释放并进入细胞促进成纤维细胞增殖。通过 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除实验,证明了 pGO-CHI/SF 支架具有优异的抗氧化能力。体外细胞活性氧(ROS)清除实验中,染色并观察过氧化氢刺激后的成纤维细胞,实验表明 pGO-CHI/SF支架能够清除 ROS。体外巨噬细胞的培养实验,证明了 pGO-CHI/SF支架能够下调炎症因子的表达水平。<br> (4)将 miR@pGO-CHI/SF 水凝胶作为伤口敷料用于大鼠的背部全层皮肤伤口缺损修复实验,探究了 miR@pGO-CHI/SF 水凝胶在体内的促进神经修复和促进组织生长的能力。结果表明,与未施加材料的空白组相比,miR@pGO-CHI/SF水凝胶具有优异抗炎能力,促进了神经修复和胶原纤维的再生,表现出优异的组织修复能力,促进伤口愈合。<br> 综上所述,我们制备了一种兼具吸水性、可回复、导电和优异组织修复能力的生物活性支架。该支架具有抗炎抗氧化、耦合内源性电场以及基因治疗的功能。本论文研究工作为伤口组织再生材料的研发提供了一种新思路。
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