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摘要摘要<br>　　背景和目的<br>　　急性白血病是一类造血系统恶性克隆性疾病，起病迅速，病程进展快，死亡率较高，严重危害着人类的生命健康。化疗是急性白血病在临床治疗中的主要方案，但化疗药物的长期使用会对机体其他正常细胞造成损伤，同时产生多药耐药性，导致疗效下降。为了解决这些问题，纳米粒因其良好性能被用作药物递送的载体。中空介孔二氧化硅是一类生物相容性良好且具备丰富载药空间的无机纳米粒，适合作为多种药物共同递送的载体。<br>　　但是，纳米粒在体内易被免疫系统识别为外源物从而被快速清除，因此开发了一种用细胞膜包裹纳米粒的仿生策略，细胞膜表面蛋白可以将纳米粒伪装成自体细胞从而避免这种清除作用，实现免疫逃避。红细胞在体内数量较多、寿命较长，细胞膜提取纯化过程简便，适合用于纳米药物的仿生递送。<br>　　基于上述背景，本文拟利用仿生策略进行药物递送，将两种常用化疗药阿霉素与长春新碱共载于中空介孔二氧化硅中，红细胞膜包裹在载药纳米粒表面进行仿生化，红细胞的长循环特性与中空介孔二氧化硅微球高负载能力结合实现阿霉素与长春新碱的共装载共递送和药物在体内的长循环，提高化疗药物对于白血病的治疗效果，减轻全身性毒性作用。<br>　　方法<br>　　首先基于st?ber法和Na2CO3刻蚀法合成中空介孔二氧化硅微球(HMSN)，利用低渗裂解法和机械挤出法制备红细胞膜(RBCM)，将HMSN与RBCM进行共挤出得到包膜纳米粒RBCM@HMSN。使用透射电镜、马尔文激光粒度仪、紫外可见分光光度计对它们的形貌特性、粒径分布、表面电位和紫外吸收光谱进行表征。<br>　　将阿霉素与长春新碱共同装载于HMSN中构建载药纳米粒HMSN-DOX/VCRS，利用高效液相色谱法(HPLC)考察HMSN载药量，将红细胞膜包裹在HMSN-DOX/VCRS表面构建仿生纳米药物体系RBCM@HMSN-DOX/VCRS，HPLC考察细胞膜包裹前后体系的药物释放行为。并使用马尔文激光粒度仪检测载药体系在72h内的粒径变化，对其储存稳定性进行表征。<br>　　使用CCK8法考察药物载体HMSN和RBCM@HMSN对于NIH3T3细胞存活率的影响，分别考察游离药物和载药体系对于AML细胞存活率的影响。使用试管法研究药物载体HMSN和RBCM@HMSN的血液安全性，计算溶血率。<br>　　将Ce6作为装载于HMSN中对药物载体进行定位，使用共聚焦显微镜和流式仪考察巨噬细胞(RAW264.7)对于药物载体装载不同药物包括DOX和Ce6的吞噬情况。考察上述药物模型构建的药物递送系统被AML细胞的摄取情况。<br>　　构建急性白血病小鼠模型，通过AML细胞中的Luc基因在特定条件下实现生物发光，使用活体成像系统检测生物荧光信号强度提示肿瘤细胞体内分布。<br>　　使用活体成像系统通过检测Ce6发射的荧光信号考察药物载体在白血病小鼠体内的分布情况和循环时间。<br>　　对白血病小鼠进行给药治疗，使用活体成像系统检测生物荧光信号，根据荧光信号强度评价药物治疗肿瘤效果，记录体重变化和生存期。通过Hamp;E染色评估药物的体内安全性和治疗效果。<br>　　结果<br>　　1.使用上述方法成功合成了粒径分布均匀、具有近圆形中空腔和排列整齐的介孔孔道的中空介孔二氧化硅微球，制备了近圆形红细胞膜囊泡；通过共挤出成功将RBCM均匀包裹在HMSN表面，得到药物载体RBCM@HMSN。将DOX和VCRS成功装载于HMSN中，药物释放研究中，包膜前后的载药体系均显示出延缓药物的效果，且包膜后效果更佳，稳定性更好。<br>　　2.CCK8结果显示药物载体对于NIH3T3细胞存无明显毒性。材料无明显溶血现象。随着药物浓度的增加，AML细胞存活率不断下降，结果显示单药处理组的杀伤作用高于双药组，包膜组高于未包膜组。表明双药联用的策略可以增强药物效果，本文中所构建的仿生纳米药物体系能够进一步提高药物对于癌细胞的杀伤能力。<br>　　3.共聚焦与流式结果对于巨噬细胞的吞噬作用考察结果一致，两种药物结果无明显差异，RAW264.7细胞内RBCM@HMSN荧光强度最低，AML细胞内各组荧光信号强度无明显差别。活体成像结果显示24h后RBCM@HMSN-Ce6信号强度高于HMSN-Ce6和游离Ce6组,表明RBCM@HMSN在体内外均可以减少巨噬细胞对纳米粒的吞噬，并且不影响肿瘤细胞的摄取作用。<br>　　4.活体成像结果和股骨Hamp;E结果显示RBCM@HMSN-DOX/VCRS给药组相比于其他组显示出更强的肿瘤抑制能力，并且经RBCM@HMSN-DOX/VCRS给药治疗后，小鼠的生存期也明显延长，游离药组小鼠体重明显下降，而包膜组体重几乎没有变化，Hamp;E结果表明包膜组治疗后主要器官没有明显病理变化。说明RBCM@HMSN-DOX/VCRS抑瘤效果和体内安全性较好。<br>　　结论<br>　　本研究成功构建红细胞膜包裹的中空介孔二氧化硅装载阿霉素与长春新碱仿生纳米药物体系，研究表明所制备的药物载体形貌大小符合需求，生物相容性良好，装载药物后具有药物缓释作用，红细胞膜包裹策略显示缓释效果更佳，且稳定性更好，可以使纳米药物有效地逃避巨噬细胞的吞噬作用，增长其在体内的循环时间，提高对于急性白血病的治疗效果，同时这种策略还可以减轻药物毒性，提高药物使用安全性。