检索历史 清除

摘要目的：<br>　　早泄（Premature ejaculation, PE）是男性最常见的性功能障碍，其患病率约 20%~30%。长期早泄不仅可导致患者性欲低下，还将诱发患者产生焦虑、抑郁等负面情绪，上述负面情绪则会进一步加重患者早泄的症状，形成恶性循环，给患者带来极大的身心负担，甚至导致男性不育。除此之外，早泄还会影响伴侣在夫妻性生活过程中的性满足感，进而影响夫妻性生活和谐，严重者可能导致家庭关系不和睦。当前针对 PE 的定义并不统一，但一般都包括以下三个方面要素：（1）阴道内射精潜伏期（Intravaginal Ejaculatory Latency Time, IELT）过短；（2）射精控制能力严重缺乏；（3）伴有消极的个人后果，比如痛苦，烦恼，沮丧和/或避免性亲密等。<br>　　目前常用的 PE相关定义是由国际性学会在 2014年所制定的：（1）从首次性行为开始，几乎总是在阴茎插入前或阴茎插入后 1min 内射精（Lifelong/Primary premature ejaculation, LPE/PPE），或者IELT存在显著缩短，往往少于3min (Acquired/Secondary premature ejaculation, APE/SPE)；（2）总是或几乎总是无法控制射精或延缓射精；（3）对身心健康造成负面影响，例如痛苦、烦恼、焦虑、沮丧或躲避性行为等。依据国际性学会对于 LPE 的定义，LPE的发病率约为 2-5%。综上所述，PE（尤其是 LPE）可对患者的家庭和谐、生活质量（尤其是性生活质量）以及自我认同产生深远的负面影响。然而到目前为止，PE的发病机制尚不明确。PE的发病机制可分为心理性和生物源性因素。心理性因素包括心理动力学理论，早期性行为，性环境，焦虑情绪，性行为技巧及频率等。生物源性因素则包括阴茎感觉敏化，射精反射亢进、过度兴奋、内分泌疾病、遗传易感性和 5-羟色胺（5-Hydroxytryptamine, 5-HT）受体功能障碍（神经生物学理论）等。此外，如慢性前列腺炎等泌尿系统疾病也可导致PE。不同类型PE的发病机制存在一定差异。LPE主要是由遗传性或神经生物学因素所致，例如阴茎感觉敏化或 5-HT 受体功能失调。根据神经生物学理论学说，包括中枢神经系统 5-羟色胺神经递质减少、5-羟色胺 2C 受体和/或5-羟色胺1A受体敏感性降低在内的5-HT受体功能失调是LPE的重要病因。有学者发现，5-HT神经递质低下以及 5-HT 2C 受体敏感性降低可能与男性射精阈值点降低密切相关，因此在最小的性刺激下即可发生射精。5-羟色胺再摄取抑制剂(Selective serotonin reuptake inhibitors, SSRIs)是目前治疗PE的主要药物，研究发现，SSRIs可通过阻断5-HT转运、激活5-HT2C受体从而增加突触内5-HT浓度，进一步降低5-HT 1A受体功能，并调节5-HT 1A与5-HT 2C受体之间的功能平衡，最终达到治疗 PE的效果。5-HT 2A受体也是 5-HT的一类重要受体，且在全身表达最为广泛，但其与 LPE 的关系和可能的作用机制尚不明确。因此，本研究旨在通过转录组学测序系统性探讨 LPE 的发病机制，重点着眼于5-HT 2A受体是否参与LPE的分子病理机制及其相关作用，为 LPE 的后续相关研究奠定实验室研究基础，并为未来的临床治疗和研究提供新的方向。<br>　　材料和方法：<br>　　1. Wistar大鼠LPE动物模型的构建：1.1 根据既往相关研究，我们首先选用交配实验筛选方法建立 LPE动物模型，选取 12~14周龄的雄鼠及雌鼠，雌/雄比例为 1:1，将雌鼠做双侧卵巢切除手术及激素诱导发情预处理，与雄鼠合笼进行交配实验，观察雄鼠性行为指标，包括：（1）骑跨潜伏期（秒） （Mount latency, ML）（2）插入潜伏期（秒）（Intromission latency, IL）；（3）射精潜伏期（秒）（Ejaculation latency, EL）；（4）骑跨次数（次）（Mount frequency, MF）；（5）射精频率（次）（Ejaculation frequency, EF）；1.2 通过比较Wistar雄鼠的射精频率分布，成功筛选得到合格的LPE雄鼠、射精正常雄鼠及射精延迟雄鼠，用于后续实验。<br>　　2.LPE的发病机制探讨：2.1 提取筛选得到的 LPE雄鼠及射精正常雄鼠组织样本 RNA，进行转录组学测序，通过生物信息学分析预测与 LPE相关的差异表达基因和信号通路；2.2 通过逆转录-定量 PCR (Reverse transcriptase quantitative Polymerase Chain Reaction, RT-qPCR)和免疫组化染色验证转录组学测序结果。<br>　　3.体内实验验证差异基因的分子作用：3.1 使用差异基因的特异性抑制剂干预 LPE 雄鼠，使用等量溶媒干预射精正常组雄鼠，分析比较干预前与干预治疗后雄鼠的性行为学尤其是射精频率改变；3.2 分别提取药物干预前及药物干预后的雄鼠组织样本 RNA，再次进行转录组学测序，并通过生物信息学分析预测相关差异基因表达水平的变化，验证差异基因与 LPE 的关系及其可能参与的分子病理机制。<br>　　结果：<br>　　本研究通过体内实验结合转录组学测序，系统性探讨了LPE的发病机制。<br>　　1.Wistar大鼠LPE动物模型的建立：根据既往相关研究基础，我们通过连续6周的交配实验成功筛选得到6只LPE雄鼠，其射精频率显著高于射精正常组及射精延迟组，但三组雄鼠的骑跨潜伏期无显著差异，提示三组雄鼠性欲水平相近。<br>　　2. LPE的发病机制探讨：2.1 获取筛选得到的3只LPE雄鼠与3只射精正常雄鼠的阴茎龟头组织，提取组织样本的 RNA，进行转录组学测序，提取得到的 RNA 纯度及完整性均满足转录组学测序要求，通过对两组雄鼠转录组学测序结果的分析发现，LPE雄鼠与射精正常雄鼠比较，共存在409个差异基因，其中上调基因209个，下调基因200个，KEGG通路富集分析提示Neuroactive ligand-receptor interaction 信号通路为可能的靶点通路，其中 HTR2A为目标差异基因，在 LPE 雄鼠中表达显著上调，HTR2A 与 Cysltr1 存在蛋白互作，且Cysltr1在LPE雄鼠中的表达水平也显著上调；2.2 转录组学测序结果的验证：通过RT-qPCR比较了HTR2A和Cysltr1在LPE雄鼠和射精正常雄鼠中的表达水平，结果提示，HTR2A及Cysltr1在LPE雄鼠中表达均显著上升，提示本研究中的转录组学测序分析结果是准确可靠的。<br>　　3.体内实验验证 HTR2A 作用：3.1 通过二次交配实验成功筛选得到 3 只LPE 雄鼠， 10 只射精正常雄鼠以及 3 只射精延迟雄鼠；3.2 使用酮色林（Ketanserin, KT）经腹腔注射治疗 LPE 雄鼠，射精正常雄鼠予以等量溶媒干预，比较干预治疗前与干预治疗后雄鼠的性行为学变化，结果发现接受 KT治疗后，LPE雄鼠的射精频率显著减少，而射精正常组雄鼠在接受等量生理盐水干预后，其射精频率无显著改变；3.3 提取 KT治疗后的 LPE雄鼠阴茎龟头组织与KT治疗前的LPE雄鼠阴茎龟头组织的RNA，得到的RNA纯度和完整性均符合转录组学测序要求；3.4转录组学测序生物信息学分析提示，KT干预后共501个基因较KT干预前表达显著上调，而296个基因表达显著下调，其中HTR2A与CYSTLR1表达均较KT干预前显著下调。<br>　　结论：<br>　　本研究通过交配实验成功筛选出 LPE 雄鼠，并首次通过转录组学测序探讨了LPE的发病机制：<br>　　1.通过基于射精分布理论的交配实验建立LPE动物模型的方法是准确可靠的，且筛选得到的LPE雄鼠具有良好的代表性；<br>　　2. HTR2A参与LPE的发病机制，HTR2A表达上调可发挥性兴奋作用，促进LPE的发生发展；<br>　　3.HTR2A与Cysltr1存在蛋白互作，其共同参与LPE的发病机制；<br>　　4.HTR2A的特异性抑制剂可有效改善LPE雄鼠的症状，HTR2A是LPE的潜在治疗靶点。