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摘要目的：<br>　　肾上腺皮质癌(Adrenocortical carcinoma, ACC)是一种罕见的内分泌恶性肿瘤，易发生复发或转移，缺乏有效的系统治疗方案。糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor, GR)是配体诱导转录因子超家族的成员，广泛存在于机体组织细胞中，其在多种肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用。但GR在ACC中的表达情况以及在肿瘤进展中扮演着怎样的角色，目前尚不明确。因此，本研究以GR基因为研究靶点，旨在深入探究GR在ACC中的表达特征、临床意义、调控肿瘤细胞生物学行为的作用及相关分子机制，并探索可能的干预手段，为ACC寻找潜在的治疗靶点提供新思路。<br>　　材料和方法：<br>　　首先从TCGA数据库、GEO数据库和GTEx数据库中获取相应的RNA表达数据，分析和比较GR在正常肾上腺、肾上腺腺瘤及ACC中的mRNA表达水平。其次采用免疫组化染色方法检测78例ACC患者肿瘤组织中的GR蛋白表达情况，并进行免疫反应性评分将表达量化。根据GR表达水平将TCGA和WCH队列的ACC患者分为GR高表达组和GR低表达组，分别比较两组之间各临床病理特征的差异，包括年龄、性别、肿瘤分期、肿瘤位置、肿瘤内分泌功能状态以及Ki-67指数等；并使用Kaplan-Meier生存曲线分析GR表达水平与患者总体生存期和无病生存期的关联，此外，采用Cox多因素回归模型来明确GR在ACC中的独立预测价值。<br>　　基于TCGA-ACC队列转录组数据，生物信息学分析GR表达水平与免疫细胞浸润水平、免疫检查点分子表达、微卫星不稳定性(MSI)、肿瘤突变负荷(TMB)、免疫治疗生物标志物以及TIDE评分的关联。并使用WCH-ACC队列患者的肿瘤组织石蜡切片进行免疫细胞的免疫荧光染色，验证生物信息学分析(CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞、树突状细胞及巨噬细胞)。<br>　　使用慢病毒包装质粒，构建稳定敲低对照细胞株(shNC)、GR稳定敲低细胞株(shGR)、稳定过表达对照细胞株(OE-Ctrl)和GR稳定过表达细胞株(OE-GR)。使用CCK-8实验检测各稳转株细胞增殖能力，克隆形成实验检测各稳转株集落形成能力，Transwell试验检测各稳转株细胞迁移和侵袭能力，流式细胞学检测各稳转株的细胞周期变化和细胞凋亡情况。此外，构建ACC裸鼠皮下肿瘤模型验证干扰GR表达后对小鼠肿瘤生长的影响。<br>　　对GR稳定敲减细胞株与稳转敲减对照株进行转录组测序，并进行生物信息学分析参与GR调控ACC恶性表型的关键基因通路。使用qPCR及WB法验证GR表达变化对相关通路分子表达水平的影响，并使用WCH-ACC队列患者肿瘤组织石蜡切片进行相关下游分子的免疫组化染色，进一步分析与GR表达和患者预后的关联。干扰GR表达后，检测细胞内氨基酸含量、GSH及ROS水平变化。干扰下游相关基因表达检测对GR导致的细胞增殖、迁移和侵袭能力影响。采用核质分离方法和细胞免疫荧光检测下游相关蛋白在细胞中的定位及表达情况。体外-体内实验探究靶向下游相关信号通路药物的抗肿瘤活性与协同作用，使用生化仪检测小鼠肝肾功能相关指标，并对重要器官组织进行HE染色以评估药物的安全性。<br>　　结果：<br>　　1.我们基于TCGA公共数据库及人ACC病理组织免疫组化染色对GR在ACC肿瘤组织中的表达情况进行了分析，结果显示与正常肾上腺组织和腺瘤相比，GR在ACC中的表达水平有所升高。但在ACC中，GR表达水平与肿瘤激素分泌状态有关，其在皮质醇分泌过量ACC中的mRNA和蛋白表达水平均显著下调。生存分析显示GR低表达患者的复发转移风险较高，预后更差，且Cox多因素分析显示GR是ACC患者预后的独立预测因子。<br>　　2.生物信息学分析及病理组织免疫荧光染色结果提示GR表达水平与免疫细胞浸润水平呈显著正相关，且与免疫检查点及免疫治疗相关生物标志物的表达水平有关，具有预测免疫治疗疗效的潜力。<br>　　3.细胞功能实验发现敲低GR后，肿瘤细胞的增殖能力、克隆形成能力、迁移及侵袭能力均显著提高，同时敲减GR后会减少G0/G1期细胞比例，促使更多细胞进入S期或G2/M期。而过表达GR后则出现与之相反的结果，同时细胞凋亡比例也明显上升。此外，小鼠体内实验也证明敲减GR表达后可促进ACC肿瘤的生长。<br>　　4.我们通过细胞转录组测序、生物信息学分析及细胞实验验证发现GR表达下调可激活PI3K-Akt-mTOR信号通路，诱导ATF4活化进入细胞核内，增强ATF4及靶基因xCT的表达水平，从而增加细胞内胱氨酸及其他氨基酸含量、升高GSH/GSSG比率和降低细胞内ROS水平，并且导致细胞对谷氨酰胺的依赖性增强。而干扰ATF4/xCT基因表达可逆转由GR导致的恶性生物学行为。此外，靶向抑制PI3K信号通路可干扰GR信号引起的ATF4活化入核过程，从而降低ATF4-xCT通路分子的表达。<br>　　5.基于上述理论机制，我们在裸鼠ACC的移植瘤模型中探究了靶向xCT及PI3K通路治疗ACC的疗效，发现xCT分子抑制剂与PI3K通路抑制剂均有一定的抗肿瘤活性，而与单药治疗相比，靶向xCT分子与PI3K通路联合治疗可显著抑制小鼠肿瘤的生长，达到了协同抑制肿瘤生长的效果。体内的安全性评估表明药物联合治疗未出现明显的毒副反应，具有较好的安全性。<br>　　结论：<br>　　在本研究中，我们通过生物信息学分析、临床病理组织、体外-体内功能实验及相关机制验证等多个维度，对GR在ACC中的临床意义及功能机制进行了较为全面的探究，并得出如下结论：GR表达水平与ACC激素分泌功能、免疫状态及患者预后密切相关，且GR低表达患者预后较差。GR表达下调可通过激活PI3K-Akt-mTOR信号通路，上调ATF4-xCT通路分子的表达及活性，影响肿瘤细胞氨基酸代谢，从而促进肿瘤进展。而靶向抑制xCT分子和PI3K信号通路联合治疗可显著抑制肿瘤生长，具有协同抗肿瘤的作用。