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摘要目的：<br>　　RAD51相关蛋白1(RAD51-associated protein 1，RAD51AP1)通过同源重组(Homologous recombination，HR)修复参与膀胱尿路上皮癌(Urothelial carcinoma of bladder，UCB)发生发展过程的作用机制尚无探索。本研究以RAD51AP1基因为研究靶点，旨在探索RAD51AP1在UCB发生发展中的作用，并寻找可能参与下游信号调控的通路和关键基因，为寻找UCB药物治疗的新靶点和新的信号通路提供初步理论依据。<br>　　材料和方法：<br>　　1、获取癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas，TCGA)-BLCA、GSE52519、GSE133624数据集筛选差异表达基因(Differentially expressed genes， DEGs)，筛选出包括RAD51AP1在内的多个核心调控基因。通过TCGA-BLCA数据库分析UCB癌组织中与癌旁组织RAD51AP1的表达差异，分析RAD51AP1表达情况与UCB的总生存期(Overall survival，OS)的相关性。通过四川大学华西医院泌尿外科2007年1月至2012年3月期间行膀胱癌根治性手术治疗的68例UCB患者临床资料进行验证，通过免疫组织化学染色(Immunohistochemistry，IHC)检测RAD51AP1在UCB癌组织和癌旁组织的表达差异，Kaplan-Meier生存分析验证RAD51AP1基因表达与UCB预后的相关性。<br>　　2、通过检测不同UCB细胞株RAD51AP1的mRNA和蛋白表达水平，选取EJ和T24作为主要研究细胞株。构建抑制RAD51AP1表达的慢病毒后感染目的细胞株，分别在mRNA和蛋白水平检测RAD51AP1表达情况。通过Celigo细胞计数实验、细胞凋亡实验、细胞克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验进一步验证抑制RAD51AP1对UCB细胞株增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。<br>　　3、对抑制RAD51AP1表达(shRAD51AP1)细胞株及对照组细胞株质控后进行mRNA测序，通过全基因组表达谱芯片、智能通路分析(Ingenuity Pathway Analysis，IPA)中的经典通路、IPA的相互作用网络等一系列分析探索下游信号通路和可能参与的关键基因，通过流式检测实验验证RAD51AP1同细胞周期信号通路的关系。<br>　　4、选定CDK1作为下游信号通路的关键基因，在体外过表达RAD51AP1和抑制表达CDK1，设置不同分组后分别在mRNA和蛋白水平检测表达情况，后通过CCK-8细胞增殖实验、细胞克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验体外验证二者的关系，最后通过小鼠成瘤模型体内验证体外研究的结果。<br>　　结果：<br>　　1．通过TCGA-BLCA、GSE52519、GSE133624数据集分析，共发现118个DEGs，功能富集分析确定DEGs与细胞周期通路显著相关，其中包括RAD51AP1在内的多个核心调控基因。选取RAD51AP1基因作为研究靶点，通过TCGA-BLCA数据库和临床数据的研究验证，发现UCB癌组织中的RAD51AP1基因表达明显高于癌旁组织(Plt;0.001)，RAD51AP1高表达与UCB的不良预后OS相关(Plt;0.05)。RAD51AP1可能参与UCB的发生发展，是未来治疗的新靶点。<br>　　2．通过对不同UCB细胞株对比后选取EJ和T24作为主要研究细胞株。慢病毒感染后发现抑制RAD51AP1可以降低UCB细胞株EJ和T24的增殖(Plt;0.05)、迁移和侵袭能力(Plt;0.05)，增加细胞的凋亡(Plt;0.001)。<br>　　3．对shRAD51AP1细胞行mRNA测序，基于IPA的经典通路分析发现细胞周期通路被显著抑制。通过细胞周期实验证实RAD51AP1的下调可以导致细胞周期阻滞，结合IPA相互作用网络分析发现RAD51AP1能够间接影响细胞周期通路中的CDK1基因。<br>　　4．选取CDK1作为下游基因进行回复实验的验证。通过体外功能检测和功能研究证实抑制表达CDK1可以逆转过表达RAD51AP1对EJ和T24细胞增殖(Plt;0.01)、迁移和侵袭能力(Plt;0.05)的影响。通过动物成瘤体内实验验证(Plt;0.05)，结合蛋白表达情况、IHC等验证结果同体外研究的结果一致。<br>　　结论：<br>　　1．RAD51AP1在UCB癌组织中的表达明显高于癌旁组织，其表达情况与OS显著相关，可作为UCB未来研究的潜在靶点。<br>　　2．抑制RAD51AP1表达可以明显降低UCB细胞EJ和T24的增殖、迁移和侵袭能力，增加UCB细胞的凋亡。<br>　　3．RAD51AP1基因可以影响细胞周期通路中的CDK1基因，下调CDK1可以逆转过表达RAD51AP1对UCB细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。