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摘要目的<br>　　慢性乙型肝炎（chronichepatitisB，CHB）患者在妊娠期病情易加重，但其中的机制尚不完全清楚。本研究通过比较HBeAg+的CHB孕妇、HBeAg-的CHB孕妇及健康孕妇自然杀伤细胞（naturalkillercell，NKcell）的表型和功能以及Th17细胞（Thelper17cell,Th17cell）的比例和功能差异，并探究NK细胞是否影响Th17细胞的极化过程，寻找NK细胞负向调控Th17细胞极化的关键分子。最终为妊娠期乙型肝炎的预防和治疗提供实验依据。<br>　　方法<br>　　1、以临床HBeAg+的CHB孕妇、HBeAg-的CHB孕妇及健康孕妇为研究对象，对各组外周血中HBV病毒载量（HBV-DNA）、谷丙转氨酶（ALT）以及乙肝五项等进行检测。通过流式细胞术检测外周血NK细胞各亚群的比例、活化性受体以及抑制性受体、干扰素-γ（interferon-γ，IFN-γ）和颗粒酶B（Granzyme-B）的表达，同时检测外周血Th17细胞的比例。通过ELISA检测血浆中IFN-γ及IL-17的水平。对各组孕妇外周血CD56brightNK和CD56dimNK细胞亚群与HBV-DNA、ALT及Th17细胞的比例进行相关性分析。<br>　　2、分选健康孕妇外周血CD4+T淋巴细胞，在加入IL-1β和IL-23的条件下向Th17细胞极化。在培养体系中加入IFN-γ或同时加入IFN-γ的中和抗体，ELISA方法检测培养体系中IL-17水平。将分选的HBeAg+孕妇和HBeAg-孕妇的NK细胞，分别与健康孕妇外周血分离的CD4+T淋巴细胞在IL-1β和IL-23存在的条件下共培养，流式细胞术检测培养体系中IL-17+Th17细胞比例，ELISA检测培养体系中IL-17水平。<br>　　结果<br>　　1、与健康孕妇和HBeAg-孕妇相比，HBeAg+孕妇NK细胞亚群比例发生改变，主要表现为CD56brightNK细胞比例降低；与HBeAg-孕妇相比，HBeAg+孕妇CD56dimNK细胞比例增加。<br>　　2、HBeAg+孕妇CD56brightNK细胞比例与其血浆中HBV病毒载量（R=-0.52,P＜0.05）以及ALT水平（R=-0.41,P＜0.05）均呈显著负相关关系；HBeAg-孕妇的CD56brightNK细胞比例与其血浆中HBV病毒载量以及ALT水平没有相关性。说明NK细胞的亚群比例变化与妊娠期乙型肝炎的严重程度相关。<br>　　3、与HBeAg-孕妇相比，HBeAg+孕妇的NK细胞抑制性受体NKG2A表达下调；与健康孕妇和HBeAg-孕妇相比，NK细胞抑制性受体CD158b也表达下调；与健康孕妇相比，HBeAg+孕妇的NK细胞活化性受体NKG2D和CD226的表达上调。提示HBeAg+孕妇的NK细胞功能可能增强。<br>　　4、与健康孕妇和HBeAg-孕妇相比，HBeAg+孕妇的总NK细胞分泌IFN-γ水平显著降低，血浆IFN-γ水平显著降低；与HBeAg-孕妇相比，HBeAg+孕妇的CD56brightNK细胞和CD56dimNK细胞分泌IFN-γ水平均显著降低。<br>　　5、与健康孕妇和HBeAg-孕妇相比，HBeAg+孕妇的总NK细胞的Granzyme-B表达水平显著升高；与HBeAg-孕妇相比，HBeAg+孕妇的CD56brightNK细胞和CD56dimNK细胞的Granzyme-B表达水平均显著升高。<br>　　6、与健康孕妇和HBeAg-孕妇相比，HBeAg+孕妇的Th17细胞比例显著增高；与健康孕妇相比，HBeAg+孕妇血浆IL-17水平显著增高；HBeAg+孕妇CD56brightCD16-NK细胞比例与血浆IL-17水平呈显著负相关（R=-0.43，P＜0.05）。<br>　　7、分离健康孕妇的CD4+T细胞，加入诱导因子IL-1β和IL-23进行Th17细胞的极化培养。培养体系中加入IFN-γ可显著抑制IL-17产生，而同时加入IFN-γ中和抗体，培养体系中IL-17水平显著高于IFN-γ单独作用组。<br>　　8、分离HBeAg+孕妇和HBeAg-孕妇的NK细胞，分别与上述CD4+T细胞共培养。与对照组相比，HBeAg-孕妇来源的NK细胞和T细胞共培养体系中IL-17水平显著下调，而HBeAg+孕妇组无显著性差异；与HBeAg+孕妇相比，HBeAg-孕妇来源的NK细胞和T细胞共培养体系中Th17细胞比例及IL-17水平均显著下调。<br>　　结论<br>　　1、HBeAg+孕妇外周血NK细胞亚群比例异常改变，主要表现为CD56dimNK细胞亚群增多，CD56brightNK细胞亚群减少。NK细胞活化和Granzyme-B表达能力增强，但IFN-γ分泌水平下降。<br>　　2、NK细胞来源的IFN-γ可以抑制Th17细胞的极化，HBeAg+孕妇NK细胞分泌IFN-γ降低，不能有效抑制Th17细胞的极化，这可能是慢性乙型肝炎在妊娠期加重的原因之一。