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摘要目的本研究旨在筛选脓毒症相关性脑病（Sepsisassociatedencephalopathy，SAE）小胶质细胞炎性活化关键基因，验证并分析组蛋白去乙酰化酶9（Histonedeacetylase9，HDAC9）在SAE小胶质细胞炎性活化以及继发性神经元凋亡中的作用及机制。<br>　　方法（1）从基因表达综合数据库中获取脓毒症患者外周血全转录组测序数据集GSE65682以及体外脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）诱导小胶质细胞活化模型基因芯片数据集GSE103156。采用加权基因共表达网络分析（Weightedgeneco-expressionnetworkanalysis，WGCNA）筛选GSE65682数据集中与脓毒症临床诊断显著相关模块，与GSE103156数据集中LPS处理前后小胶质细胞的差异表达基因（Differentiallyexpressedgenes，DEGs）取交集，利用基因本体论和京都基因与基因组百科全书对DEGs进行功能富集分析。在此基础上采用STRING构建蛋白质-蛋白质相互作用网络，并采用Cytoscape以及Lasso回归分析筛选核心基因。（2）构建LPS刺激小胶质细胞活化体外细胞模型，采用实时荧光定量PCR（Quantitativereal-timePCR，qPCR）检测炎症因子以及核心基因表达。（3）采用慢病毒载体在小胶质细胞中过表达HDAC9（oe-HDAC9）,以空载体作为对照（oe-ctrl）；采用Westernblot检测过表达效率、炎症因子、JAK1-STAT3信号通路、氧化应激相关蛋白和凋亡相关蛋白表达。ELISA检测小胶质细胞分泌至上清中的IL-6浓度。（4）采用活性氧试剂盒检测BV2细胞中活性氧（Reactiveoxygenspecies,ROS）生成水平，采用Griess法检测一氧化氮（Nitricoxide，NO）生成水平，利用细胞划痕实验检测过表达HDAC9对小胶质细胞迁移能力的影响。（5）收集小胶质细胞条件培养基刺激HT-22神经元细胞，采用流式细胞术检测HT-22神经元凋亡率。（6）通过LPS（10mg/kg）腹腔注射法构建小鼠SAE模型，利用Morris水迷宫实验检测模型；qPCR、Westernblot、免疫荧光染色法和免疫组织化学法检测小胶质细胞活化以及HDAC9的变化。<br>　　结果（1）WGCNA分析得到GSE65682数据集中与脓毒症临床诊断相关9个模块、共332个基因，通过Limma分析得到GSE103156数据集中LPS刺激前后小胶质细胞的DEGs1272个，二者取交集后得到18个交集基因，进一步采用Lasso回归分析筛选得到4个枢纽基因分别为GPR183、HDAC9、NADK、LRRC25。（2）qPCR结果证实在LPS刺激的小胶质细胞炎性活化模型中，GPR183和HDAC9的mRNA表达下调，LRRC25表达上调，而NADK无明显变化；选取HDAC9进行后续研究。（3）过表达HDAC9可促进LPS诱导的小胶质细胞炎症因子IL-1β、iNOS、IL-6表达，并促进JAK1-STAT3信号通路磷酸化激活。采用化学抑制剂抑制JAK1-STAT3信号通路，可缓解LPS诱导的小胶质细胞炎性活化、抑制HDAC9表达。（4）过表达HDAC9促进小胶质细胞NOX4表达、抑制Keap1-NRF2/HO-1信号通路，促进ROS生成；过表达HDAC9可促进小胶质细胞iNOS表达，促进NO生成，从而增强细胞氧化应激。（5）过表达HDAC9增强小胶质细胞的迁移能力。（6）过表达小胶质细胞HDAC9可加重小胶质细胞条件培养导致的神经元HT-22细胞凋亡，抑制抗凋亡蛋白Bcl2表达、上调促凋亡蛋白Bax表达。（7）在LPS诱导的小鼠SAE模型中，LPS组小鼠认知功能受损，海马组织中HDAC9表达增加，炎症因子表达上调，小胶质细胞炎性活化。<br>　　结论本研究利用生物信息学筛选得到SAE小胶质细胞炎性活化4个关键基因，初步证实关键基因HDAC9通过JAK1-STAT3信号通路正反馈促进小胶质细胞的炎性活化，通过调控NOX4、Keap1-NRF2/HO-1信号通路促进小胶质细胞氧化应激，加重继发性神经元凋亡，进而参与SAE的发生发展。本研究为SAE的发病机制研究提供了新的思路和依据。