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摘要人鼻病毒（HumanRhinovirus，HRV）是引起常见感冒的病原体之一，它与慢性阻塞性肺疾病、哮喘等疾病病原体交叉感染会危及人的生命健康。由于人鼻病毒血清型种类繁多，通过疫苗治疗人鼻病毒引起的疾病缺乏可行性。因此，人鼻病毒进入细胞的机制成为相关疾病防治研究的切入点。前人研究提出HRV进入机制的假设，即人鼻病毒进入细胞时，内部衣壳蛋白VP4脱离病毒衣壳并与细胞膜结合形成膜孔，病毒RNA、衣壳蛋白VP4和VP1的N末端形成五重对称复合体，且在VP4脱离病毒衣壳之后RNA释放并进入细胞。然而，在病毒进入过程中，人鼻病毒HRV衣壳蛋白VP4和VP1与RNA的作用尚待阐明。<br>　　本文研究人鼻病毒HRV衣壳蛋白VP4与VP1的表达及其体外相互作用，旨在揭示人鼻病毒基因组进入细胞的机制，取得如下主要结果：<br>　　(1)克服VP4疏水性强、在大肠杆菌中表达量低、纯化收率低等困难，实现了人鼻病毒衣壳蛋白VP4和VP1的表达纯化。构建了三种人鼻病毒衣壳蛋白VP4的重组原核表达质粒，使其在大肠杆菌BL21（DE3）中表达，从中筛选得到VP4蛋白的最优表达载体及纯化条件，其中VP4与TrpLE共表达载体的目的蛋白在包涵体中表达，经溴化氰裂解、HPLC分离实现VP4的高收率和高纯度。<br>　　(2)建立体外膜模拟系统研究VP4在细胞膜上的状态，利用SPR技术分析VP4与VP1及其与RNA分子间的相互作用。将VP4插入在体外膜Bicelle中进行透射电镜分析，结果显示VP4能够在Bicelle中形成孔状复合体。然而VP4在膜上的寡聚状态及孔状复合体的结构尚待进一步研究解析。SPR分析结果显示，VP4蛋白与VP1N70蛋白接触产生响应值，表明两者之间具有弱分子间亲和力；而VP4和VP1与RNA之间无响应值，表明无分子间相互作用。此外，电镜分析结果显示VP1N70蛋白也具有较强的寡聚性，可聚集形成球体。<br>　　以上结果提示：VP4在人鼻病毒进入细胞过程中脱离病毒衣壳，寡聚并结合在细胞膜上形成孔状复合体，VP4与VP1N70的弱分子间相互作用使得VP1结合在孔状复合体上，而病毒衣壳则通过VP1的C端接近膜孔复合体，从而使得病毒RNA通过膜孔进入细胞质。<br>　　本文结果为深入研究人鼻病毒HRV衣壳蛋白VP4与VP1在人鼻病毒HRV进入细胞的分子机制提供了实验基础，具有理论意义，将有助于推动人鼻病毒HRV相关疾病的防治策略研究。