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摘要卡波氏肉瘤相关疱疹病毒（Kaposi’s Sarcoma-associated herpesvirus, KSHV）,也被称为人类疱疹病毒 8 型，属于致瘤性的双链 DNA γ 疱疹病毒家族。流行病学研究表明，KSHV 感染会引发三种人类恶性肿瘤，包括卡波氏肉瘤（Kaposi’s Sarcoma, KS）和两种 B 淋巴细胞增生性疾病：原发性渗出性淋巴瘤（Primary effusion lymphoma，PEL）和多中心卡斯特曼病（Multicentric Castelman’s disease, MCD）。与其它疱疹病毒类似，KSHV在其生命周期中也建立了两个不同的阶段：潜伏感染期和裂解复制期。大量研究已经证明，KSHV的潜伏感染期和裂解复制期都参与了病毒的致瘤过程。<br>　　近年来，随着对KSHV裂解复制期的深入研究，人们发现KSHV再激活裂解复制产生大量具有感染性的子代病毒并感染新的宿主细胞，不仅有利于 KSHV 建立持续感染，同时也是病毒致瘤的关键。因此，探索病毒裂解复制期的分子机制对于了解病毒的感染致病机制至关重要，可能为 KSHV 相关疾病的治疗和预防提供潜在的靶点和策略。在病毒再激活裂解复制的过程中，KSHV基因组的复制对于成熟子代病毒的产生是必需的。KSHV 编码了一系列核心的 DNA 复制蛋白，包括ORF6（ssDNA binding protein, 单链 DNA 结合蛋白）、ORF9（DNA polymerase, DNA 聚合酶）、ORF40-41（(primase-associated factor, 引物酶辅因子）、ORF44 （helicase, 解旋酶）、ORF56（primase, 引物酶）和 ORF59（polymerase processivity factor, 聚合酶加工因子）。KSHV 开放阅读框（ORF）44 编码的 DNA 解旋酶是六种核心DNA复制蛋白之一，它在解开病毒双链DNA和启动DNA复制中起着至关重要的作用，但调控解旋酶的分子机制尚未完全阐明。<br>　　在我们之前的研究中，发现宿主蛋白 N-Myc 下游调控基因 1 （ N-Myc downstream regulated gene 1, NDRG1）可作为一个支架蛋白与潜伏相关的核抗原（Latency-associated nuclear antigen, LANA）和细胞增殖核抗原（Proliferating cell nuclear antigen, PCNA）形成复合物，从而协助 LANA 招募 PCNA 到病毒基因组上，促进潜伏期病毒基因组的复制。有趣的是，我们在NDRG1的相互作用蛋白质谱数据中，发现KSHV编码的三个蛋白被富集到，ORF44是其中之一。首先，我们通过免疫共沉淀和免疫荧光实验验证了NDRG1与KSHV的解旋酶ORF44存在相互作用，并且其N端结构域与ORF44的N端区域结合。接着，NDRG1表达动力学检测和相应双荧光素酶报告基因实验表明 KSHV ORF50 编码的复制和转录激活因子（replication and transcription activator, RTA）与辅因子重组信号序列结合蛋白Jκ（recombination signal sequence-binding protein-Jκ, RBP-Jκ）一起促进了 NDRG1的转录，进而增加了 NDRG1 的蛋白表达。进一步地，在 iSLK.RGB 细胞中敲低NDRG1 基因不影响病毒基因的转录水平，但会大大降低 ORF44 的蛋白水平，从而削弱了病毒的裂解复制能力。此外，放线菌酮素半衰期实验表明NDRG1增加了ORF44的稳定性，后续的泛素化实验及ORF44赖氨酸突变体的蛋白丰度检测证明NDRG1 通过减少 ORF44 的 79 和 368 位赖氨酸残基的多聚泛素化水平来抑制泛素化蛋白酶体途径介导的ORF44降解。<br>　　综上所述，我们的研究结果表明，NDRG1是一个新的ORF44结合蛋白，并且通过抑制 ORF44 的泛素化来维持 ORF44 的稳定性，从而促进病毒的裂解复制过程。这一研究为了解KSHV裂解复制的分子机制提供了新的线索，同时NDRG1可能作为一个潜在的抗病毒靶点，为抗病毒研究提供了新的视角。