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摘要血吸虫病（schistosomiasis）是一种由血吸虫（schistosome）感染所引起的人兽共患寄生虫病。在我国，主要流行的是日本血吸虫病，由血吸虫可溶性虫卵抗原（solubleeggantigen,SEA）诱发的慢性纤维化疾病严重威胁人类健康。日本血吸虫虫卵通过外泌体向宿主传递生物活性物质，调控宿主的基因表达和免疫反应，进而参与宿主的疾病进程。微小RNA（microRNA,miRNA）是一种小的内源性非编码RNA，能大量存在于外泌体中，参与调节宿主的免疫应答并介导宿主病理损伤。日本血吸虫能分泌携带大量miRNA的外泌体，然而许多miRNA对血吸虫病肝纤维化的作用还有待阐明。<br>　　在课题组前期研究的基础上，本研究先用新西兰白兔建立日本血吸虫感染模型，以获得大量日本血吸虫虫卵，并利用超速离心法收集鉴定虫卵外泌体。然后对日本血吸虫虫卵外泌体进行高通量测序，筛选能刺激肝星状细胞（Hepaticstellatecells,HSCs）活化的目标miRNA，发现了一种新型miRNA-30（novelmiRNA-30），通过体内和体外两个层面来探究其对日本血吸虫病肝纤维化的作用机制。<br>　　在体外实验中，对人和小鼠的HSCs转染了不同剂量的novelmiRNA-30模拟物（novelmiRNA-30mimic），并通过qPCR和WesternBlot检测肝纤维化相关因子α-平滑肌肌动蛋白（α-smoothmuscleactin,α-SMA）、I型胶原和Ⅲ型胶原（Col1(α1)和Col3(α1)）的表达，结果显示三种纤维化相关因子的表达均显著升高，提示novelmiRNA-30对HSCs具有活化作用。采用miRDB软件预测示novelmiRNA-30的潜在靶基因，选取评分高于90并同时存在于人和小鼠体内的靶基因40余种。将novelmiRNA-30mimic转染入人肝星状细胞系LX-2中，qPCR检测筛选的潜在靶基因表达水平，选取NT5E和RORA基因进行双荧光素酶检测，结果显示日本血吸虫虫卵外泌体源的novelmiRNA-30可能通过靶向宿主RORA基因来增强转录翻译的稳定性，进而促进宿主肝纤维化。<br>　　在体内实验中，本研究分别从过表达和沉默两个方向探索novelmiRNA-30对于小鼠日本血吸虫病肝纤维化的调控作用。在对健康小鼠尾静脉注射过表达载体rAAV8-miRNA-30第3周时，采用qPCR检测小鼠肝脏及血清中novelmiRNA-30的表达，结果显示肝脏中novelmiRNA-30高表达，而血清中未检测到，提示rAAV8-miRNA-30能靶向肝脏并使novelmiRNA-30在肝脏内成熟加工。在对健康小鼠尾静脉注射过表达载体rAAV8-miRNA-30第49天、第63天和第77天，采用qPCR、WesternBlot和羟脯氨酸含量检测来对小鼠的肝纤维化指标的表达，结果发现，纤维化指标α-SMA、Col1(α1)和Col3(α1)高表达并且羟脯氨酸含量显著增高，提示过表达novelmiRNA-30能促进肝纤维化的进程。与之相反的是，C57BL/6小鼠经皮感染尾蚴20±1条，同时尾静脉注射海绵载体rAAV8-anti-miRNA-30，沉默novelmiRNA-30的表达，在感染的第42天和第56天，采用Masson三色染色检测各组小鼠肝脏肉芽肿和纤维化的面积，结果显示沉默组的小鼠肝脏肉芽肿和胶原面积显著减小，提示体内沉默novelmiRNA-30后可能减轻感染小鼠肝纤维化的程度。<br>　　总之，本研究结果显示日本血吸虫虫卵外泌体源的novelmiRNA-30可以促进血吸虫病肝纤维化，其机制可能是通过靶向宿主RORA发挥作用。本项研究丰富了miRNA跨物种调控血吸虫病肝纤维化的理论，为日本血吸虫病肝纤维化的防治提供了新思路。