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摘要目的：<br>　　绘制 N6-甲基腺苷（ N6-methyladenosine ， m6A ）修饰的环状核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）图谱，分析其基本特征及 m6A 修饰对环状 RNA 表达和组织特异性的影响；根据泛癌中环状 RNA 差异表达谱，聚焦食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC），筛选出circKRT13分子，明确其对ESCC细胞增殖、迁移能力的作用及其对亲本基因KRT13的调控机制。<br>　　方法：<br>　　1. 应用 Circm6A 软件对人和小鼠 RNA 甲基化免疫共沉淀（methylated RNA immunoprecipitation，MeRIP）测序数据进行m6A修饰环状RNA鉴定。<br>　　2. 对至少在 3 个组织中表达且每百万映射的读长数（reads per million mapped reads，RPM）≥0.1 的环状 RNA 进行分析，用环状 RNA 中的中位 RPM计算特异性分数，将组织特异性指数（tissue specificity index，TSI）≤0.6 的环状RNA认定为广泛表达、TSI=1的为特异性表达。<br>　　3. 使用R包DESeq2进行差异表达分析，对蛋白编码基因和至少在3个样本中RPM≥0.1的环状RNA进行差异表达分析，认定差异倍数绝对值大于2且调整后 P 值小于 0.05 的信使 RNA（messenger RNA，mRNA）和环状 RNA 为差异表达显著。<br>　　4. 采用 MeRIP-qPCR 检测筛选环状 RNA 的 m6A 修饰及 circKRT13 转染质粒后 KRT13 m6A 修饰水平的变化。<br>　　5. 采用逆转录实时定量聚合酶链式反应（reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）检测circKRT13、KRT13在ESCC和癌旁组织中的表达及放线菌素 D 作用后 KRT13 RNA 量的变化。<br>　　6. 采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK8）、Transwell、克隆形成实验探索circKRT13对ESCC细胞的功能。<br>　　7. 采用 RNA 结合蛋白免疫沉淀（RNA immunoprecipitation assay，RIP）实验验证 KRT13 与 YTH N6-甲基腺苷 RNA 结合蛋白 2（YTH N6-methyladenosine RNA binding proteins2，YTHDF2）的相互作用。<br>　　结果：<br>　　1. 应用Circm6A软件在人中共鉴定出1004733个环状RNA，其中有m6A修饰的环状 RNA（m6A circRNA modifications，m6A-circRNAs）168146 个，鼠中鉴定出 436454 个环状 RNA，其中 m6A-circRNAs 69908 个，统计环状 RNA TSI指数和表达，发现m6A-circRNAs组织特异性占比和表达降低。<br>　　2. 应用R包DESeq2对肝癌、胃癌、肺癌、结直肠癌、食管癌、唾液腺癌进行差异表达分析，其中肝癌、胃癌及唾液腺癌环状 RNA 上调个数多于下调，肺癌、ESCC及结直肠癌环状RNA下调个数多于上调，ESCC最为明显。ESCC中mRNA表达下调个数多于上调，其中KRT13下调。<br>　　3. MeRIP-qPCR 实验显示随机选取的 10 个环状 RNA 定量结果均比免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）组表达高10倍以上；circKRT13过表达后KRT13 m6A修饰定量结果较对照组降低。<br>　　4. RT-qPCR 证实在 ESCC中 circKRT13、KRT13 表达均下调；放线菌素D 实验证明在 ESCC 细胞中 circKRT13 过表达后 KRT13 RNA 量较对照组增高。<br>　　5. CCK8、Transwell 及克隆形成实验提示 circKRT13 过表达后 ESCC 细胞系增殖、迁移及克隆形成能力降低。<br>　　6. 应用 YTHDF2 抗体进行 RIP 实验显示，结合下来的 KRT13 在免疫沉淀（immunoprecipitation，IP）组有条带，较 Input 组弱，IgG 组未见条带；采用YTHDF2抗体行免疫印迹实验示，IP组有条带，较Input组弱，IgG组未见条带。<br>　　结论：<br>　　1. 绘制人和鼠中 m6A-circRNAs 的图谱，分析发现 m6A 修饰可能负向调控环状RNA的表达和组织特异性。<br>　　2. 绘制人类泛癌环状 RNA 的差异表达谱，从整体看，环状 RNA 在肿瘤中表达下调。<br>　　3. circKRT13 在 ESCC 中表达下调，能抑制 ESCC 细胞的增殖和迁移能力。<br>　　4. 在 ESCC 中，circKRT13 通过 m6A-YTHDF2 方式调控其亲本基因 KRT13的表达。