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摘要目的：据世界卫生组织报道，肺癌是导致癌症患者死亡的首要原因。我国是亚洲地区肺癌发病率和死亡率最高的国家，其中约85%的肺癌患者为NSCLC亚型。肺癌发病隐匿且早期多无明显症状，大部分患者确诊时处于晚期。传统治疗手段包括手术切除、放化疗、靶向治疗等晚期预后差，因此迫切需要探索新的肺癌防治方法。近年来，中草药天然提取物因高效低毒的特点在肿瘤治疗领域备受关注，与放化疗药物或靶向药物联合使用，具有增效减毒作用。人参皂苷Rg3（Ginsenoside Rg3）是人参中发挥抗肿瘤作用的核心成分，被广泛应用于肿瘤治疗。本课题主要围绕人参皂苷Rg3联合布格替尼治疗非小细胞肺癌，基于网络药理学，结合体内外实验以及免疫模型，探索联合用药作用及机制。<br>　　方法：（1） 基于网络药理学探索人参皂苷Rg3与布格替尼对NSCLC的作用机制：本研究以人参皂苷Rg3单体和布格替尼为研究对象，运用网络药理学探索其联合治疗在非小细胞肺癌中的作用机制。（2）人参皂苷 Rg3联合布格替尼对 NSCLC 细胞系的作用：本研究以非小细胞肺癌NCI-H2228和NCI-H3122细胞株为研究对象，研究人参皂苷 Rg3联合布格替尼对非小细胞肺癌的作用和机制。（3）基于 hPBMC共培养探索人参皂苷Rg3联合布格替对NSCLC的影响 ：根据 GO 功能分析和KEGG 通路富集结果，猜测人参皂苷 Rg3可能通过激活免疫系统提高与化疗药物联合治疗效果。（4）人参皂苷Rg3联合布格替尼对NSCLC CDX小鼠模型的影响：取30只雄性SCID Beige小鼠，通过右腋皮下注射NCI-H2228细胞5×106个/只。（5）人参皂苷Rg3联合布格替尼对NSCLC人源化hPBMC-CDX小鼠模型的影响：取60只雌性NOG小鼠，通过右腋皮下注射NCI-H2228细胞5×106个/只，7天后选择55只小鼠通过尾静脉注射hPBMC细胞构建免疫模型。（6）人参皂苷Rg3联合布格替尼对ALK-TKI获得性耐药NSCLC的增殖影响：本研究构建了ALK抑制剂布格替尼耐药细胞株NCI-H2228-BR，检测联合用药对NCI-H2228-BR细胞增殖抑制作用。<br>　　结果：（1）通过Swiss Target Prediction等数据库检索获得人参皂苷Rg3与布格替尼治疗NSCLC相关交集靶点267个；生成940条蛋白相互作用连线，并列举出作用力最强的前十五个靶点（SRC、STAT3、EGFR、PTPN11 等），GO 功能富集和KEGG分析分别获得2235条结果和145条信号通路，主要包括MAPK、PI3K/AKT、EGFR-TKI、PD-L1表达和PD-1检查点、T细胞受体信号通路等。（2）人参皂苷Rg3与布格替尼对 NSCLC 细胞系细胞均具有增殖抑制作用，其中人参皂苷 Rg3 对NCI-H2228和NCI-H3122细胞的IC50值分别为307.1μmol/L和236.4μmol/L；布格替尼对细胞的IC50值分别为443.6 nmol/L和974.3 nmol/L；当布格替尼浓度为400 nmol/L和900 nmol/L时，对NSCLC细胞抑制率小于50%；人参皂苷Rg3与布格替尼联用显著抑制NSCLC细胞系的增殖著改变细胞形态、阻滞细胞G1期以及抑制细胞迁移；在机制方面，联合用药抑制PI3K/AKT信号通路。（3）人参皂苷Rg3可在体外激活hPBMCs发挥抗肿瘤作用；在hPBMCs和NCI-H2228细胞共培养的效靶比为16:1时，人参皂苷Rg3（40 μmol/L）对肿瘤细胞抑制率达60%；当共培养的效靶比为16:1或32:1时，人参皂苷Rg3与布格替尼联合几乎完全抑制肿瘤细胞增殖；当共培养的效靶比为16:1时，与对照组比较，联合用药组显著降低TNF-α水平，显著提高IFN-γ（P＜0.05）水平。（4）在CDX小鼠模型中，人参皂苷Rg3对小鼠肿瘤有一定抑制作用（P=0.23）。与未人源化小鼠比较，人源化模型小鼠外周血中CD45/CD3比例升高，小鼠免疫重建；与对照组比较，给药组小鼠肿瘤显著被抑制（P＜0.05），人参皂苷Rg3 组、布格替尼组和联合用药组抑瘤率分别为 22.67±13.80%、53.07±18.27%和80.96±6.33%；从 HE 染色结果看，对照组小鼠肿瘤细胞排列致密、紧实，给药组肿瘤细胞相对稀疏，其中联合用药组肿瘤最小且细胞排列最稀疏；TUNEL凋亡染色结果显示，与对照组比较，联合用药组肿瘤细胞凋亡最多。（5）成功构建布格替尼耐药细胞株NCI-H2228/BR（RI=25.3）。人参皂苷Rg3对NCI-H2228-BR细胞有一定的增殖抑制作用，与布格替尼联合用药能显著抑制细胞增殖（P＜0.05）。<br>　　结论：（1）根据网络药理学结果分析，推测人参皂苷Rg3与布格替尼联合对NSCLC细胞的增殖抑制作用与SRC、STAT3、EGFR、PTPN11等靶点相关，可能通过调控MAPK、PI3K/AKT以及T细胞受体信号通路等发挥协同抗NSCLC的作用；（2）人参皂苷Rg3对NSCLC细胞的增殖均有抑制作用，与布格替尼联合能显著提高抗肿瘤作用，包括抑制细胞增殖、迁移以及阻滞细胞周期，二者联合用药协同增效主要与PI3K/AKT信号通路被抑制有关；（3）人参皂苷Rg3体外激活hPBMCs提高联合用药的抗肿瘤作用，能够显著抑制子TNF-α的表达水平，促进IFN-γ分泌。人参皂苷Rg3能够提高机体免疫，对小鼠肿瘤生长具有一定的抑制作用，联合布格替尼能显著提高抑瘤作用；（4）人参皂苷Rg3对NSCLC耐药细胞（NCI-H2228/BR）也具有增殖抑制作用，与布格替尼联合时能显著提高耐药细胞对布格替尼的敏感性，与化药联合使用协同增效，为临床治疗提供了新思路。