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摘要研究背景<br>　　血吸虫病（Schistosomiasis）作为严重的人兽共患寄生虫病，对全球公共卫生造成重大威胁。当下吡喹酮仍是血吸虫病的首选治疗药物，吡喹酮在杀灭血吸虫方面效果显著，但它并不能全然抑制血吸虫虫卵肉芽肿炎症的进展。值得注意的是，众多研究表明，血吸虫感染的早期炎症阶段，病情存在可逆性。此阶段若能及时采取有效干预措施，或可从根本上控制病情恶化，大幅减轻患者痛苦，降低疾病对身体的损害。<br>　　巨噬细胞在血吸虫感染引发的炎症反应中，起着关键作用。巨噬细胞作为免疫系统重要部分，其极化状态对炎症的发生、发展及最终走向，都有显著影响。已有研究显示，血吸虫感染过程中，巨噬细胞极化状态动态变化与炎症进程息息相关。这一发现为研究血吸虫病早期炎症期的干预策略，提供了极具潜力的切入点。<br>　　本研究前期发现YTHDC1在日本血吸虫感染小鼠肝脏中表达明显升高，且其表达巨噬细胞被LPS刺激后也显著上调。推测YTHDC1可能参与了宿主感染血吸虫的发生发展。因此本研究拟通过过表达及敲低YTHDC1分子，研究其在日本血吸虫感染小鼠肝脏虫卵肉芽肿炎症的作用及机制。以期能够为血吸虫病在早期炎症阶段的防治提供潜在的治疗靶点。<br>　　研究目的：通过探寻与YTHDC1相互作用的分子及调控机制，深入剖析其在血吸虫病肝脏虫卵肉芽肿阶段的作用及机制。<br>　　研究内容：<br>　　(1) 通过查阅数据库和构建小鼠日本血吸虫感染肝脏虫卵肉芽肿炎症期模型，检测YTHDC1在人肝细胞癌、CCl4处理小鼠以及日本血吸虫感染小鼠后的表达情况。<br>　　(2) 体内实验检测YTHDC1在小鼠肝脏血吸虫虫卵肉芽肿炎症期中的作用：采用尾静脉注射腺相关病毒的方式实现对YTHDC1的敲低。随后，HE染色法观察肝脏虫卵肉芽肿及炎性细胞浸润状况，天狼猩红染色法观察胶原纤维的沉积状况，并且检测血清肝功能指标 ALT、AST。再通过qPCR检测多种炎症因子，对敲低YTHDC1之后小鼠肝脏的炎症状态展开检测。<br>　　(3) 体外实验对YTHDC1在巨噬细胞中的作用进行验证：通过qPCR检测多种炎症因子，对敲低YTHDC1之后小鼠肝脏的炎症状态展开检测。<br>　　(4) 根据前期关于Gm16685质谱分析结果以及GO分析和KEGG分析，初步发现YTHDC1可能与Gm16685存在相互作用，进一步利用RNApulldown和RIP实验验证两者相互作用。<br>　　(5) 体内实验验证敲低Gm16685在血吸虫虫卵肉芽肿炎症期中的作用：运用 HE染色法对肝脏虫卵肉芽肿及炎性细胞浸润状况予以观察，利用天狼猩红染色法观察胶原纤维的沉积状况。通过qPCR和WB和免疫荧光技术，验证体内实验敲低Gm16685在血吸虫虫卵肉芽肿炎症期中对YTHDC1的影响，并且在体外验证在巨噬细胞中Gm16685的变化对YTHDC1的影响。<br>　　(6) 通过qPCR验证体内、外敲低YTHDC1对Gm16685的影响。<br>　　(7) 通过数据库预测与YTHDC1相互作用的蛋白，再通过qPCR在巨噬细胞中验证敲低 YTHDC1 后，被预测基因的基因水平变化。<br>　　(8) 通过WB与免疫荧光技术验证敲低巨噬细胞的YTHDC1后，被预测基因的蛋白水平变化。<br>　　研究结果：<br>　　通过数据库统计YTHDC1在人肝细胞癌中以及CCl4处理小鼠肝脏中表达上调，且在日本血吸虫感染虫卵肉芽肿炎症期小鼠肝组织中表达量显著升高，且敲低YTHDC1分子能够有效缓解肝损伤以及炎症反应。为深入探究其中的分子机制，我们通过 RNA pulldown实验和RNA免疫沉淀（RIP）实验，成功鉴定出YTHDC1与Gm16685相互作用。进一步实验表明，敲低YTHDC1不仅显著降低了Gm16685的表达量，同时Gm16685和促炎性细胞因子的表达量也随之显著减少。同时，敲低和过表达 Gm16685 同样会引起 YTHDC1 表达量的明显变化。这实验结果揭示了Gm16685与YTHDC1之间存在着紧密的相互调控关系。而敲低YTHDC1又能够抑制CLK1的表达。Gm16685/YTHDC1/CLK1通路促进日本血吸虫感染小鼠肝脏虫卵肉芽肿炎症。<br>　　结论：<br>　　本研究揭示了日本血吸虫感染小鼠肝脏中YTHDC1的关键作用。YTHDC1表达随感染显著升高，且促进血吸虫病虫卵肉芽肿炎症的发展。它与lncRNAGm16685相互促进，协同推动病情进展。同时，敲低YTHDC1还会下调CLK1表达，而CLK1作为参与RNA代谢过程的蛋白激酶，其表达变化可能影响相关基因的转录与翻译，进而在血吸虫病的病理进程中发挥作用。因此，YTHDC1有望成为日本血吸虫病治疗的潜在靶点，为防控该病提供了新思路。