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摘要目的:预测并鉴定人Ki-67和PCNA的HLA-A2限制性CTL表位，为后续肿瘤疫苗的制备提供理论基础。<br>　　 方法:在Genebank查找Ki-67和PCNA的氨基酸序列，使用BIMAS和SYFPEITHI两个数据库对人Ki-67和PCNA的HLA-A2限制性CTL表位进行打分，将两个数据库评分的乘积作为总评分，根据总分高低预测Ki-67和PCNA的CTL表位。运用标准Fmoc方案合成候选肽和阳性对照肽(HIV-1 pol476-484)，并进行纯化，鉴定其纯度及分子量。采用经典T2-肽结合实验初步筛选、验证预测结果，以荧光系数（FI）作为候选肽与HLA-A2分子结合力大小的衡量指标：FI>1.5，亲和力高，1.0<FI≤1.5亲和力中等，0.5<FI≤1.0亲和力低。将鉴定为HLA-A2阳性的外周血单个核细胞用候选肽和阳性肽体外预刺激3次后作为效应细胞，用ELISPOT法检测效应细胞分泌IFN-γ的能力，对候选肽的免疫原性进行验证。<br>　　 结果:通过BIMAS法与SYFPEITHI法相结合的办法，将Ki-67及PCNA基因HLA-A2限制性CTL表位的总评分从高到低排列，分别选定得分最高的7条和8条九肽作为候选肽。合成的候选肽及阳性对照肽（HIV-1 pol 476-484）经鉴定纯度均达到95％以上，分子量测定值与理论值相符。经典T2-肽结合实验结果显示Ki-67候选肽中LQGETQLLV (280-288) 与HLA-A2分子具有中等亲和力，FLTLWLTQV (444-452)及SLVMHTPPV (538-546) 具有低亲和力。PCNA候选肽中KVLEALKDL (14-22)与HLA-A2分子具有中等亲和力，KVSDYEMKL (110-118) 、SMSADVPLV (228-236) 和SILKKVLEA (10-18) 具有低亲和力。表位肽免疫原性检测结果显示Ki-67候选肽中FMGTPVQKL（2282-2290）和 LQGETQLLV（280-288）形成的斑点数目（234.00±7.55）、（235.33 ±21.22）与阳性对照组（251.00±18.68）无显著差异，明显高于阴性对照组（12.67±2.52）。PCNA候选肽中KVLEALKDL（14-22）、KVSDYEMKL（110-118）和SMDSSHVSL（39-47）形成的斑点数目（161.00±9.00）、（153.00±11.36）、（245.67±29.48）与阳性对照组无显著差异，明显高于阴性对照组。<br>　　 结论:Ki-67表位肽LQGETQLLV（280-288）和PCNA表位肽KVLEALKDL (14-22) 分别是Ki-67和PCNA的HLA-A2限制性CTL表位。