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摘要目的：探讨眼镜蛇毒细胞毒素有效组分CTXn、CTX1 对抗吗啡依赖作用及机制。<br>　　 方法：<br>　　 （1）建立吗啡依赖CPP 模型，观察眼镜蛇毒中分离粗毒细胞毒素Ⅳ低、中、高剂量对吗啡成瘾大鼠CPP 影响，及对催促戒断行为学影响。<br>　　 （2）筛选: SD 大鼠吗啡(10mg/kg，sc)训练8 天,形成稳定CPP 模型后，大鼠分为粗毒毒素Ⅳ各单体组分高剂量组、吗啡成瘾对照组及0.9％N.S 组，实验组给予粗毒毒素Ⅳ不同组分1/10 LD50 剂量,观察各组分对吗啡已形成CPP 影响。<br>　　 （3）观察CTXn 对吗啡CPP 获得和维持影响。①建立吗啡依赖模型后，腹腔给予CTXn 不同剂量（0.5、1.0、2.0mg/kg）连续5天，测试CPP 及痛觉变化,大脑切片,免疫组化染色,观察TNF-α在齿状回表达；② SD 大鼠在施吗啡前30分钟腹腔给予不同剂量CTXn（0.5、1.0、2.0mg/kg），连续8 天，观察CTXn 预处理对吗啡CPP 获得及镇痛影响；③ SD 大鼠腹腔注射不同剂量CTXn（0.5、1.0、2.0mg/kg），连续18 天，观察其自身是否引起CPP；④ SD 大鼠分别腹腔给予CTXn（1.0mg/kg）或鞘内给予CTXn(0.025mg/kg)，连续用药24 天在d0、d2、d4、d6、d8、d10、d12、d14、d16、d18、d20、d22、d24测试大鼠痛阈，观察痛阈变化，同时在d0、d4、d8、d12、d16、d20、d24 采用ELISA 法检测血清抗体效价。<br>　　 （4）观察CTX1 对吗啡CPP 获得和维持影响。①建立吗啡依赖模型后，再腹腔给予不同剂量CTX1（0.1、0.2、0.4mg/kg）连续5天，测试CPP 及痛觉变化，大脑切片，免疫组化染色，观察TNF-α在海马的表达；② SD 大鼠在施吗啡前30 分钟腹腔给予CTX1 不同剂量（0.1、0.2、0.4mg/kg），连续8 天，观察CTX1预处理对吗啡CPP 获得及镇痛影响、TNF-α的含量变化及其在CA 区表达、LTP；③ SD 大鼠腹腔注射不同剂量CTX1（0.1、0.2、0.4mg/kg），连续8 天，观察其自身是否引起CPP；④ SD 大鼠分别腹腔给予CTX1（0.2mg/kg）组或鞘内给予CTX1(10μg/kg)，连续用药24 天在d0、d2、d4、d6、d8、d10、d12、d14、d16、d18、d20、d22、d24测试大鼠痛阈，观察痛阈变化，在d0、d4、d8、d12、d16、d20、d24 采用ELISA 法检测血清抗体效价。<br>　　 结果：<br>　　 （1）吗啡可诱导大鼠产生明显CPP，眼镜蛇粗毒细胞毒素Ⅳ高、中、低剂量组自身均不能引起CPP;不同剂量粗毒细胞毒素Ⅳ可抑制吗啡已形成CPP,抑制纳洛酮诱导的戒断症状。<br>　　 （2）细胞毒素Ⅳ分离纯化得到5个组分，分别为：Ⅳ1、Ⅳ3、Ⅳ4、Ⅳ5、Ⅳ7。<br>　　 其中组分Ⅳ4、Ⅳ5可抑制大鼠引起CPP;抑制纳洛酮诱发戒断症状，与组分Ⅳ1、Ⅳ3、Ⅳ7 不同，组分Ⅳ4、Ⅳ5组大鼠体重平均增长分别为：15.5％、17.1 与生理盐水组增长相似，Ⅳ1、Ⅳ3、Ⅳ7 组大鼠体重平均增长为6.2％、4.9、8.8％与吗啡对照组相似。氨基酸序列测定组分Ⅳ4 为CTXn，组分Ⅳ5为CTX1。<br>　　 CTXn 序列：LKCNQ LIPPF YKTCA AGKNL CYKMF MVAAP KVPVK RGCIDVCPKS SLLVK YVCCN TDRCNCTX1 序列：LKCNK LIPIA SKTCP AGKNL CYKMF MMSDL TIPVK RGCIDVCPKS NLLVK YVCCN TDRCN。<br>　　 （3）CTXn 对吗啡CPP 获得和维持影响①大鼠吗啡成瘾后CTXn 处理可剂量依赖性地抑制吗啡诱导CPP 及痛敏。CTXn 不同剂量组（0.5、1.0、2.0mg/kg）CPP值分别从成瘾时的451.8s±49.2s、450.8s±72.3s 及450.7s±91.2s 下降到164s±49.5s、77.4s±41.1s 及68.2s±37.2s；大鼠痛阈值分别从成瘾时15.5s±1.6s、15.2s±3.2s 及15.6s±2.3s，提高至22.4s±1.7s、27.5s±2.8s 及28.6s±3.6s。②吗啡成瘾后，CTXn后处理可明显增加齿状回TNF-α表达，一定程度上恢复齿状回神经元数量。③CTXn预处理后，大鼠CPP 值未见显著升高，可剂量依赖性抑制吗啡CPP 获得。预处理呈剂量依赖性的增强镇痛作用。④ CTXn 自身不会产生CPP。CTXn 腹腔用药后，血清CTXn 抗体效价增高，镇痛效力下降；但CTXn 鞘内给药未见CTXn抗体产生及镇痛耐受。<br>　　 （4）CTX1 对吗啡CPP 获得和维持影响：①大鼠吗啡成瘾后CTX1 后处理可剂量依赖性地抑制吗啡诱导CPP 维持及痛觉过敏。大鼠成瘾后，CTX1 处理可明显增加海马CA 区TNF-α表达。② CTX1 预处理可剂量依赖性地抑制吗啡诱导CPP获得，镇痛作用呈剂量依赖性。CTX1 可明显增加在血清中TNF-α含量及在海马CA 区表达，解除吗啡对LTP的影响。③ CTX1 自身不会产生CPP。CTX1 腹腔用药后，血清抗CTX1 抗体效价逐渐增高，镇痛作用相应下降，但CTX1 鞘内给药后未见抗体产生及镇痛耐受。<br>　　 结论：<br>　　 （1）细胞毒素Ⅳ中分离纯化的单体组分CTXn和CTX1 剂量依赖性抑制吗啡诱导CPP 获得及维持。<br>　　 （2）CTXn和CTX1 自身没有成瘾性，二者可抑制吗啡诱导CPP 获得，预防吗啡成瘾，有良好镇痛作用,可抑制吗啡痛敏，长期应用会产生抗体引起镇痛耐受导致镇痛效力降低，鞘内给药可避免。<br>　　 （3）CTXn 促进TNF-α在海马齿状回表达、促进神经元恢复。CTX1 可增加TNF-α的含量，促进TNF-α在中枢海马表达，影响吗啡成瘾大鼠LTP。<br>　　 （4）CTXn、CTX1 对吗啡成瘾有较好抑制和预防作用。