摘要褪黑激素(Melatonin,MEL)是松果体和视网膜分泌的一种重要内分泌激素,它在多个物种的多个组织中广泛存在,是光照信息同生殖系统协调关系中的重要信号,光照对繁殖机能的调节依靠褪黑激素介导,与褪黑激素受体(Melatonin receptor,MTNR)结合来调节动物的昼夜节律和繁殖变化。本研究旨在从分子水平上了解鸡MTNR基因的遗传变异以及开产前后不同组织的表达差异,以便为地方鸡种的遗传改良提供依据。研究结果如下:<br> 本研究以文昌鸡为研究对象,设计了多对引物,运用克隆测序及直接测序方法,分别扩增MTNR1A、MTNR1B和MTNR1C三个受体基因的5′UTR和外显子区域,并与文昌鸡的产蛋性状做关联分析。结果表明:MTNR1B受体基因的5′UTR存在14个SNPs以及1个插入缺失位点。其中-778位点突变基因(A→G)对文昌鸡中期(22-31周龄)产蛋数和46周龄总产蛋数的显性效应分别为达到了2.3枚和6.2枚。对后期(32-46周龄)产蛋数和46周龄总产蛋数而言,-216位点C对A为优势等位基因,加性效应值分别为2.5枚和3.2枚;显性效应分别为3.5枚和6.8枚,且表现为超显性。两个位点的单倍型分析表明,AA单倍型对46周龄的总产蛋数效应值在4种单倍型中最低;AA/AA合并基因型母鸡的开产日龄显著晚于AC/AA和GC/GC基因型个体(P<0.05)。MTNR1A、MTNR1B受体基因的外显子高度保守,而在MTNR1C受体基因exon3上存在C378T和G381A两个SNPs位点,但是这两个位点并没有导致氨基酸的改变。以β-actin基因为内标,运用qRT-PCR方法,比较了MTNR1A、MTNR1B和MTNR1C基因在心脏、肝脏、输卵管、卵巢、脑和视交叉组织及在鸡开产前后表达量的差别。结果表明:MTNR1A基因在不同组织开产后均表现为表达上调(除脑中表达下调外),在开产前后和开产前各组织中的表达量差异并不显著,但在开产后各组织中的表达量差异显著,且以卵巢表达量最高。与开产前相比,开产后各组织中MTNR1B和MTNR1C基因除在视交叉表现为表达上调外,在其余组织中的表达量均呈现下调趋势。MTNR1B基因在同一组织开产前后表达量的差异并不显著,但在开产前或开产后的不同组织中表达量有显著差异,且均以视交叉表达量最高,卵巢中表达量最低;而MTNR1C基因除在开产前或开产后的不同组织中表达量有显著差异外,在心脏、输卵管、脑组织开产前后也有显著差异。
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