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摘要糖皮质激素（glucocorticoids, GCs）是由肾上腺皮质束状带细胞分泌的一种类固醇（甾体）激素，作为应激反应的枢纽发挥重要的维持内环境稳定作用，临床上GCs 被广泛应用于抗炎、抗休克、抗过敏及免疫抑制等药理作用，其作用机制除经典的基因组机制外，还存在着非基因组作用机制。<br>　　 GCs的非基因组机制，即可不依赖基因组的途径而对组织或细胞产生快速调节作用，其特点是作用快，不能被其核受体拮抗剂所阻断，也不能被转录或蛋白合成抑制剂所阻断，在GCs与大分子物质（如BSA）偶联后，短时间内不能进入细胞内的情况下，其作用仍可以发生。<br>　　 GCs对循环系统的作用主要表现在其可以通过允许作用增强血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,vsMC)对儿茶酚胺(CA)的敏感性，提高血管的张力和维持血压。在临床应用也表现在某些低血压患者尤其是抢救休克患者时，单独使用去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)升压效果欠佳时，同时给予少量皮质醇升压效果明显增强。长期以来，一直认为，GCs是通过经典基因组机制促进CA的生物合成或增加VSMC 膜上CA受体数量，以及调节CA 受体介导的细胞内的信号转导途径发挥其对血压调节的允许作用。但是，在临床休克救治时应用GCs，数分钟内患者对CA的反应性就会增高，这一现象并不能用基因组机制解释。近年来一些研究显示，皮质醇能够在数分钟内增加CA的血管敏感性，提示GCs对血压调节的“允许作用”中可能存在着非基因组调节机制。<br>　　 我们前期研究以去肾上腺的感染性休克大鼠为模型，GCs能在10分钟内迅速逆转大鼠血压对NE 敏感性的降低，对持续滴注NE的大鼠注射GC后能立即升高血压；对分离培养的大鼠肠系膜血管平滑肌细胞，GC能迅速增强NE 介导的细胞收缩，同时GCs能够使NE 所致的肠系膜血管平滑肌细胞内actin 重排变得更规则。<br>　　 此外，GCs可以增高去甲肾上腺素引起的血管平滑肌细胞细胞内游离钙浓度[Ca2+]I升高的峰值。结果提示，GC对NE 介导的升压和VSMC收缩的增强作用可能存在非基因组调节机制，该作用可能与[Ca2+]I的改变有关。<br>　　 平滑肌细胞的收缩调节主要包括肌球蛋白轻链（myosin light chain, MLC）磷酸化依赖性途径和非MLC 磷酸化依赖性途径。前者主要有钙依赖性及钙敏化两种机制，后者主要通过蛋白激酶C（protein kinase C, PKC）、细胞外相关激酶（extracellular signal-related kinase, ERK）以及p38等途径调节细胞的收缩。在平滑肌细胞收缩的起始阶段，钙依赖性机制起到重要作用，而在平滑肌细胞收缩的维持阶段，钙敏化机制发挥重要作用。与此同时，ERK和p38在调节平滑肌细胞的收缩性中亦发挥重要作用。近年来有关钙敏化机制的研究进展迅速，一系列证据显示这种钙敏化机制主要是通过三聚体G蛋白、RhoA及其底物Rho 激酶介导，它不仅参与了平滑肌的收缩和血管重塑，还参与了细胞的其它功能包括应力纤维和粘着斑的形成、细胞骨架的重组、细胞的分化、基因的表达以及细胞凋亡等。<br>　　 本课题以A7r5(Rat aortic smooth muscle cells)大鼠主动脉平滑肌细胞株为研究对象，应用地塞米松(dexamethasone, Dex)和NE，观察Dex对NE 介导VSMC 收缩的快速调节作用，并探讨其分子机制。<br>　　 由此，本课题进行了以下研究：<br>　　 1、Dex对NE 介导的VSMC 收缩的快速调节作用：利用LPS 模拟感染性休克时的内环境，应用Western Blotting 方法检测MLC的磷酸化水平，作为衡量细胞收缩程度的重要指标，观察Dex对NE 介导的VSMC 收缩作用的快速调节作用。同时应用GCs 核受体拮抗剂RU486，进一步观察Dex对NE 介导的VSMC 收缩的调节作用是否通过基因组机制而实现。<br>　　 2、Dex对NE 介导的VSMC 收缩快速调节作用的机制：<br>　　 （1）RhoA-ROCK通路的激活：采用Western Blotting 方法检测ROCK下游的靶目标MYPT1磷酸化程度来衡量RhoA-ROCK通路的激活；<br>　　 （2）应用ROCK 特异性抑制剂Y-27632，进一步观察RhoA-ROCK通路在Dex对NE 介导的血管平滑肌细胞收缩作用的影响。<br>　　 （3）ERK和p38的激活：采用Western Blotting 方法检测ERK和p38的激活。<br>　　 主要研究结果如下：<br>　　 1、Dex 可以在短时间内快速促进NE 介导的VSMC中MLC的磷酸化水平，Dex对NE 介导的VSMC的收缩有快速促进作用，而Dex的这种作用并不是通过基因组机制而可能是通过非基因组机制实现的。<br>　　 2、Dex 可以增强NE 介导的VSMC中RhoA/ROCK通路的下游靶目标MYPT1的磷酸化，而Dex对NE 介导的VSMC中MLC的快速促进作用能够被ROCK 特异性抑制剂Y-27632 所阻断，也就是说RhoA/ROCK通路的激活增强在Dex对NE 介导的VSMC 收缩的快速促进作用中发挥重要作用。<br>　　 3、Dex 同时能够增强ERK和p38的活性，从而进一步促进并维持NE 引起的血管平滑肌细胞收缩作用。<br>　　 综上所述，Dex 可以快速促进NE 介导的VSMC中MLC的磷酸化水平，从而增强VSMC的收缩作用。而Dex的这种快速调节作用并不是通过基因组机制而实现，其可能是通过影响细胞的收缩起始阶段及维持阶段两方面而发挥作用。在细胞的收缩起始阶段，Dex 可以增高NE 引起的血管平滑肌细胞[Ca2+]I 升高的峰值；而在细胞收缩的维持阶段，Dex 一方面能够增强NE 介导的RhoA-ROCK通路的激活，另一方面Dex 也能够增强ERK和p38的活性，从而进一步维持并促进NE 引起的血管平滑肌细胞的收缩效应。<br>　　 本课题明确了GCs对NE 介导的血管平滑肌细胞的收缩快速促进作用，同时阐明了其发挥作用的可能机制，为GCs对血压快速调节的允许作用分子机制及其在临床抗休克治疗中的作用机制提供了新的依据。