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摘要研究背景<br>　　 动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是威胁人类健康的主要疾病之一，对于动脉粥样硬化机制的研究一直是心血管疾病研究领域的热点。由于动脉粥样硬化的发病过程十分复杂，目前其发病机制尚未完全阐明。近年的研究表明，动脉粥样硬化是一种特殊的炎症反应，“炎症诱发的内皮损伤-反应学说” [1]得到了广泛的认可。<br>　　 分泌型磷脂酶A2-IIA（secretory phospholipase A2 of group IIA，sPLA2-IIA）参与了动脉粥样硬化过程。炎症反应是动脉粥样硬化的主要特征，其参与了富含脂质的粥样硬化斑块的形成、进展以及破裂过程，在此过程中释放了大量的sPLA2-IIA[2] [3]。sPLA2-IIA为分泌型磷脂酶A2的亚型[4]之一，主要由血管壁平滑肌细胞与巨噬细胞等产生，属于钙依赖的磷脂酶家族，主要位于巨噬细胞集聚区、脂质核心区以及病变内膜的细胞外基质内。研究表明[5]，sPLA2-IIA通过影响细胞的脂质代谢，水解动脉内膜中含有载脂蛋白B-100的磷脂分子，生成游离脂肪酸和溶血磷脂，这些产物可以作为细胞内的第二信使或进一步成为炎性介质，从而具有促动脉粥样硬化的作用。<br>　　 目的<br>　　 利用基因体外合成技术，全基因合成人分泌型磷脂酶A2-IIA基因片段，构建含人sPLA2-ⅡA基因的慢病毒载体，转染人单核细胞，并研究其在单核细胞中的过表达及致动脉粥样硬化炎症作用。<br>　　 方法<br>　　 根据Gene Bank中sPLA2-ⅡA的基因序列，全基因合成人sPLA2-ⅡA基因片段，构建含sPLA2-IIA基因的慢病毒载体。体外培养人单核细胞（THP-1），将慢病毒载体转染人单核细胞，于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达，分别收集sPLA2-ⅡA和空病毒转染后72h的单核细胞，提取mRNA，逆转录为cDNA，进行Real-time PCR方法检测sPLA2-ⅡA mRNA表达水平与炎症因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）mRNA的表达水平。所有数据资料用SPSS13.0软件包行统计学处理。P<0.05为差异有统计学意义，P<0.01为差异有显著统计学意义。<br>　　 结果<br>　　 1.扩增出人sPLA2-ⅡA基因片段，构建含人sPLA2-ⅡA基因的慢病毒载体。测序表明构建的sPLA2-ⅡA慢病毒准确；<br>　　 2.体外培养人单核细胞，细胞生长状态良好，慢病毒转染人单核细胞，荧光显微镜下观察发现绿色荧光蛋白的表达，表明慢病毒转染真核细胞成功；<br>　　 3.利用Real-time PCR方法检测mRNA表达水平，发现与空病毒对照组相比，含有目的基因的细胞其sPLA2-ⅡA mRNA表达水平及炎症因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的mRNA表达水平明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）；<br>　　 4.转染sPLA2-ⅡA慢病毒的THP-1与ox-LDL共培养，以及与ox-LDL+瑞舒伐他汀共培养，其中含瑞舒伐他汀组其sPLA2-IIA、MCP-1和ICAM-1的mRNA表达水平明显下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　 结论<br>　　 本实验成功构建表达基因重组人sPLA2-ⅡA的慢病毒表达载体；将含目的基因慢病毒转染细胞，证实了细胞中sPLA2-IIA基因的过表达会导致sPLA2-IIA及炎症因子水平的增加；转染sPLA2-ⅡA慢病毒的THP-1与ox-LDL共培养，以及与ox-LDL+瑞舒伐他汀共培养，其中含瑞舒伐他汀组炎症因子水平明显下降，进一步证实了ox-LDL促进动脉粥样硬化炎症作用及瑞舒伐他汀的抗动脉粥样硬化炎症作用。