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摘要N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族是粘蛋白O-糖基化的起始酶，负责将供体UDP-GalNAc上的GalNAc基团转移至受体蛋白多肽链特定序列中的Ser 或Thr 羟基上，从而合成O-聚糖。近年来有人指出，O-糖基化可能与肿瘤的发生发展具有密切关系，因此对该酶家族的研究也受到越来越多重视。N-乙酰氨基半乳糖转移酶-14（GalNAc-T14）是该家族中截止至目前最新发现的成员，由于其发现相对较晚，且对其研究尚未得以广泛重视，因此对GalNAc-T14在癌组织和癌细胞中的表达、生物学特征及功能之间的关系都需要深入研究。<br>　　 本论文对GalNAc-T14基因进行了以下三方面的研究：<br>　　 1．利用生物信息学方法分析GalNAc-T14蛋白序列，钓取了其Cdna 序列，将该序列亚克隆入Pet-DsbA与His-tag 融合表达；并且对诱导及纯化条件进行了优化。通过免疫新西兰大耳白兔，获得多抗血清。利用双向免疫扩散检测所制备的多抗效价，通过免疫印迹方法鉴定多抗特异性，并检测GalNAc-T14在不同组织的表达情况。结果表明：制备的GalNAc-T14 多克隆抗血清是高特异性的，GalNAc-T14蛋白在乳腺癌细胞和肾癌细胞中均有表达，并推测如果在肿瘤组织中发现低表达GalNAc-T14 则可能显示肿瘤恶性程度较高，与肿瘤易发生转移，预后差密切相关。<br>　　 2．将GalNAc-T14和IGFBP-3 共转染MCF-7细胞，利用confocAl显微镜观察两者的共定位情况。结果表明：GalNAc-T14和IGFBP-3在细胞内存在共定位现象。<br>　　 3．成功构建了GalNAc-T14 昆虫细胞重组表达载体。将GalNAc-T14 Cdna 序列亚克隆入Pmt/BIP/V5-HIS C 载体，转染果蝇S2细胞系，为将来利用昆虫表达系统获得GalNAc-T14蛋白，为深入研究GalNAc-T14的功能奠定基础。<br>　　 总之，本论文对于GalNAc-T14 功能进行了初步的研究和探讨，将GalNAc-T14与IGFBP-3 进行亚细胞定位，并欲利用昆虫表达系统获得有活性的GalNAc-T14蛋白，为下一步开展工作提供了材料和依据。