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摘要目的：分离培养人牙周膜内Malassez上皮剩余细胞，探讨一种简便、原代培养成功率高、可重复性好的细胞培养方法，为进一步在体外研究Malassez上皮剩余细胞的生物学特性及功能提供实验条件。<br>　　 方法：选取12～25岁青少年因正畸拔除的前磨牙，采用组织块培养法和酶消化法进行牙周膜细胞原代培养。先使用含血清的DMEM培养液培养，当细胞融合达50%左右时，对Malassez上皮剩余细胞进行选择性培养，按比例逐渐减少培养液中血清含量，同时增加细胞生长所需的因子，直到完全使用无血清培养基。采用形态学观察、免疫组化方法鉴定其来源，并绘制生长曲线。<br>　　 结果：⑴分离下的牙周膜，在经过初期含血清培养基的组织块培养后，5-16天可见组织块周围有细胞爬出，大部分是成纤维细胞，细胞形态呈长梭形，其间有部分多角形或“铺路石”样细胞，为上皮细胞，胞浆均匀，轮廓清晰。⑵酶消化法培养的牙周膜细胞，在12小时后即有细胞的贴壁变形，2-3天后大部分细胞贴壁生长，所得细胞大部分也是成纤维细胞，含少量上皮细胞，成纤维细胞和上皮细胞的形态学特征与组织块法培养的相似。⑶经过12-24天牙周膜细胞原代培养，细胞融合可达50%左右，加入无血清培养基后，可见成纤维细胞的生长受到明显抑制，其数量逐渐减少，而上皮细胞在适应无血清环境后数量逐渐增加。⑷经波形丝蛋白、细胞角蛋白AE1/AE3及CK14免疫组化染色鉴定，原代培养的细胞为上皮来源，无间充质细胞混杂，符合人牙周膜上皮细胞的形态学特征和生物学特性。<br>　　 结论：①采用组织块法和酶消化法进行牙周膜细胞的原代培养，均获得了一定的成功率。两种方法皆为牙周膜细胞原代培养的可靠方法。②采用无血清培养基进行Malassez上皮剩余细胞的体外培养，可以成功地培养出实验用细胞，并作为体外细胞模型，此方法简单易行，可重复性高，为进一步研究其功能奠定基础。