换一批摘要目的：构建新型II型单纯疱疹病毒DNA疫苗，并鉴定其在真核细胞中的表达，为疫苗的免疫学效应研究打下基础。<br> 方法：在vero细胞中培养并扩增HSV-2病毒，提取总RNA，RT-PCR法扩增UL54全长基因(表达ICP27蛋白)，连接至pMD19-T Simple Vector 载体，转化大肠杆菌DH5α，提取质粒，KpnI和XbaI双酶切后将UL54片段插入真核表达质粒pCDNA3.1(+)中，构建pcDNA3.1(+)/ICP27重组质粒 （即HSV-2 DNA疫苗），经双酶切鉴定和测序鉴定正确后，脂质体法转染COS-7细胞，RT-PCR、Western-blot法鉴定HSV-2 DNA疫苗在COS-7细胞中的转录和表达。<br> 结果：成功构建pcDNA3.1(+)/ICP27重组质粒，双酶切鉴定分别显示了5428bp的pCDNA3.1(+)载体条带和1551bp的UL54条带，测序鉴定与Genbank中HSV-2 UL54序列一致。在转染COS-7细胞后，RT-PCR成功检测出UL54特异性片段184bp，Western-blot法成功检测出约53kDa ICP27蛋白的表达。<br> 结论：本实验成功构建了新型单纯疱疹病毒II型 DNA疫苗，并可在真核细胞中表达，为下一步研究该疫苗的免疫学效应打下坚实基础。
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