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摘要【背景】<br>　　肿瘤的血管生成与肿瘤的生长、侵袭、转移和预后有着密切的联系。对肿瘤血管生成的研究为肿瘤的诊断和治疗提供了新的策略和良好前景。然而，由于缺乏肿瘤血管靶向性分子，通过肿瘤血管诊断治疗肿瘤尚未取得令人满意的结果。研究证实，在肿瘤微环境的作用下肿瘤血管内皮细胞的遗传组成受到影响，表达异质性分子[1,2]。异质性分子的存在将为肿瘤的靶向诊断及治疗提供特异性靶标。肿瘤血管的异质性取决于肿瘤的异质性，由肿瘤的类型及微环境决定[3,4]。胃癌细胞与血管内皮细胞的体外共培养可以模拟肿瘤微环境，诱导胃癌血管异质性分子的表达。前期工作中，我们通过建立胃癌细胞SGC7901和人脐静脉内皮细胞的体外共培养模型，利用噬菌体随机环七肽库体外筛选获得能特异结合于共培养内皮细胞的短肽GEBP11。通过初步鉴定证实，GEBP11具有良好的胃癌血管靶向性[5]和血管生成抑制活性。筛选GEBP11的结合受体对深入研究GEBP11实现靶向性和血管抑制活性的机制具有重要意义。因此，本课题围绕筛选GEBP11结合受体的相关信息展开研究，旨在为获得GEBP11的结合受体奠定坚实的基础。<br>　　【目的】<br>　　1.获得GEBP11结合受体在多种胃癌细胞系、多种正常组织和多种器官肿瘤组织血管的表达分布信息；<br>　　2.研究GEBP11干预后Co-HUVECs分子群的表达变化，鉴定GEBP11影响的信号通路，为受体筛选提供参考信息；<br>　　3.筛选GEBP11的结合受体，为阐明GEBP11的机制和功能奠定基础。<br>　　【方法】<br>　　1.通过免疫组织化学染色的方法检测GEBP11在多种正常组织、多器官肿瘤组织血管上的结合特性，通过免疫细胞化学染色的方法检测GEBP11在不同胃癌细胞系上的结合特性；<br>　　2.通过RT-PCR和Westernblot对基因表达谱分析的结果进行验证，并对基因表达谱分析的结果进行深入的生物信息学分析，鉴定GEBP11影响的信号通路；<br>　　3.通过免疫沉淀和质谱分析的方法初步筛选GEBP11的受体。<br>　　【结果】<br>　　1.GEBP11受体的分布信息<br>　　1)GEBP11结合受体在多种细胞系上的表达分布<br>　　免疫细胞化学染色结果显示，GEBP11在Co-HUVECs和MKN45染色呈阳性，在GES染色弱阳性，在MKN28、AGS、SGC7901染色呈阴性；URP、PBS对照在各细胞系染色均呈阴性。<br>　　2)GEBP11的结合受体在多种器官肿瘤中的表达分布<br>　　GEBP11在多器官肿瘤组织的免疫化学染色显示，GEBP11的结合受体在胃癌、胰腺癌组织血管呈强阳性表达；在食管癌、结肠癌、肝细胞肝癌、子宫癌组织血管呈弱阳性表达；在直肠癌、肺癌、膀胱癌组织血管呈阴性表达。上述9种肿瘤对应的癌旁组织中，GEBP11的结合受体在子宫癌和膀胱癌的癌旁组织血管呈阳性表达；其余均为阴性表达。GEBP11的结合受体在肝细胞肝癌、膀胱尿路上皮癌组织呈阳性表达，在慢性结肠粘膜炎和慢性直肠粘膜炎的腺体、肾组织、膀胱粘膜等癌旁组织中呈阳性表达，在其余肿瘤和癌旁组织实质呈阴性表达。<br>　　3)GEBP11的结合受体在正常组织中的表达分布<br>　　GEBP11在食管、肝、胰腺、垂体、甲状腺、甲状旁腺、心肌、肺、肾、胸腺、骨髓、脾脏、乳腺、卵巢、扁桃体、睾丸、前列腺、涎腺、胃、小肠、结肠等各种正常组织血管染色均为阴性，在食管粘膜细胞、胃腺体、结肠腺体、肾小管、睾丸实质染色阳性。<br>　　2.GEBP11干预后Co-HUVECs表达变化的分子群和影响的信号通路<br>　　经验证，RT-PCR与Westernblot的结果与基因表达谱一致；差异基因筛选、GoTerm和Pathway分析为GEBP11结合受体的筛选提供了信息。<br>　　3.GEBP11受体的筛选<br>　　通过免疫沉淀-质谱分析的方法筛选获得了12个GEBP11结合受体的候选分子；通过与基因表达谱结果结合分析发现候选蛋白ZCCHC11经GEBP11处理后表达上调约3倍。<br>　　【结论】<br>　　1.GEBP11的受体表达于一些低分化胃癌细胞系和某些肿瘤组织血管，而在正常组织血管无表达。<br>　　2.RT-PCR和Westernblot结果与基因表达谱一致，差异基因筛选、GoTerm和Pathway分析为GEBP11结合受体的筛选提供了信息。<br>　　3.筛选获得了12个GEBP11结合受体的候选蛋白，其中候选蛋白ZCCHC11经GEBP11处理后表达上调约3倍。