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摘要本文主要从以下几个部分展开论述：<br>　　第一部分 实验研究野生型 VHL基因提高肾细胞癌细胞株786-O对 TRAIL敏感性的基础研究<br>　　目的:91％的散发性肾细胞癌患者中存在肿瘤抑制基因 von Hippel-Lindau(VHL)的突变或失活。VHL基因以及翻译的产物 pVHL能够在转录和翻译水平调节多种与肾细胞癌发生发展相关基因的表达,但与 TRAIL介导的肿瘤细胞凋亡之间的关系并不明确,本次研究的目标是在肾细胞癌786-O细胞株上明确野生型 VHL基因在 TRAIL介导的肿瘤细胞凋亡中的作用。<br>　　方法:选用肾细胞癌786-O细胞株、单克隆携带野生型 VHL基因全长 DNA的786-O/VHL细胞以及单克隆携带 VHL基因不同类型突变 DNA的786-O细胞,采用不同浓度的人重组 TRAIL和40ug/ml的TRAIL作用不同的时间,利用MTT和流式细胞术来检测上述细胞株对 TRAIL介导肿瘤细胞凋亡的敏感性以及野生型 VHL基因是否具有提高786-O细胞对 TRAIL敏感性的能力。RT-PCR和Western-Blot用于分析死亡受体 DR4、DR5以及凋亡抑制蛋白 c-FLIP(L)在转录和翻译的表达水平。为了准确阐明 c-FLIP(L)和TRAIL介导786-O/VHL细胞凋亡的相关性,用脂质体2000将 c-FLIP(L)转染到对 TRAIL敏感的786-O/VHL细胞中,观察高表达的c-FLIP(L)和TRAIL敏感性的关系。同时利用DR4和DR5的拮抗抗体来观察两种死亡受体和野生型 VHL基因的关系。<br>　　结果:MTT检测表明表达野生型 VHL基因的786-O/VHL细胞对 TRAIL介导的凋亡敏感,且存在剂量和时间依赖性,其余细胞株表现出对 TRAIL耐受。流式细胞仪结果表明:TRAIL(40ng/ml)处理24h后786-O/VHL细胞和786-O细胞发生凋亡的比率分别为30％和9％(P<0.05),处理72h后凋亡的比率分别为50％和10％(P<0.01)。RT-PCR和Western blot检测表明,相对于对 TRAIL耐受的786-O细胞,表达野生型 VHL基因的786-O/VHL细胞在转录和翻译水平 DR4的表达显著上调, DR5和c-FLIP(L)的表达显著下降。质粒转染后高表达 c-FLIP(L)的786-O/VHL细胞从 TRAIL敏感转变为TRAIL耐受(P<0.05)。为了进一步证实 DR4和FR5的表达水平变化与 TRAIL敏感性的相互关系,利用DR4和DR5拮抗抗体分别特异性地阻断 DR4和DR5介导的TRAIL信号通路。结果发现:DR5被阻滞后,786-O/VHL细胞仍然对 TRAIL介导的细胞凋亡敏感;而DR4被阻滞后,786-O/VHL细胞从对 TRAIL介导的细胞凋亡敏感转换为耐受(P<0.05);同时联合应用DR4和DR5的拮抗抗体,其结果与单独阻断 DR4的结果相似(P<0.05)。<br>　　结论:相对于 TRAIL耐受的786-O细胞,表达野生型 VHL基因的786-O/VHL细胞在转录和翻译水平提高了死亡受体 DR4的表达和降低了凋亡抑制蛋白 c-FLIP(L)的表达。应用DR4拮抗剂和高表达的c-FLIP(L)基因后的786-O/VHL细胞从 TRAIL敏感转变为TRAIL耐受。上述的结果阐明了野生型 VHL基因可以使 TRAIL抵抗的786-O细胞敏感化,其他突变类型的VHL没有类似作用。并且 VHL基因导入786-O细胞后的DR4受体表达水平上升和c-FLIP(L)表达水平下调是导致786-O/VHL细胞对 TRAIL敏感的重要分子机制。<br>　　第二部分 综述<br>　　VHL-HIF-VEGF信号通路和肾细胞癌<br>　　VHL基因定位于染色体3p25～26,其产物 pVHL与一些信号通路、缺氧诱导因子、氧化磷酸化的调控有关。VHL基因的失活可导致 VHL-HIF-VEGF信号通路异常,这与肾细胞癌的发生、发展有着密切的关系。VHL基因的失活机制主要包括基因突变,杂合性缺失和甲基化。针对 VHL-HIF-VEGF信号通路的靶向治疗现已在临床上广泛的应用。通过对 VHL-HIF-VEGF信号通路的研究有助于筛选用于肾细胞癌早期诊断与预后新的分子标志物。