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摘要环境内分泌干扰物(EnvironmentalEndocrineDisruptors,EEDs)指的是那些能潜在的干扰内分泌系统的功能,干扰机体的内稳态以及调节生长、发育等激素的合成、释放、转运、代谢、结合、活化(灭活)的一类外源性化合物。多氯联苯(Polychlorinated,PCBs)和有机氯农药滴滴涕(dichlorodiphenyltrichloroethane,DDT)广泛存在于自然界当中,而PCB153作为PCB的主要同系物,p,p’-DDE作为DDT的主要代谢产物,两者亲脂性强且均可通过食物链在人和动物机体内大量富集,而发挥毒效应,可严重影响人体健康或对后代产生不良的长远影响。<br>　　随着科学研究的不断发展,对细胞信号转导通路的研究也是不断深入,EEDs对细胞信号转导通路,特别是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)信号转导通路,引起了人们大量的关注。JNK信号转导通路主要受炎症刺激产生的细胞因子和外界环境刺激,与细胞周期性阻滞、细胞坏死、等有关。Frigo等的研究则发现,MAPK信号转导通路可被有机氯农药引起的应激所激活,活化AP-1,进而使细胞的一些主要功能得到相应的调节。垂体作为下丘脑-垂体-甲状腺轴的一个重要组成部分,对维持该轴的动态稳定有着十分重要的作用。<br>　　因此,在过去研究的基础上,本实验试以PCB153、p,p’-DDE为受试物,垂体细胞为靶细胞,为解释其对JNK/MAPK信号转导通路的影响,毒作用机制提供科学的依据。<br>　　第一部分:大鼠垂体细胞的离体培养及PCB-153、p,p’-DDE单独及联合作用对垂体细胞活力的影响<br>　　目的:探讨PCB-153、p,p’-DDE单独及联合作用对大鼠垂体细胞活力的影响,并且找出适宜的毒作用剂量。<br>　　方法:分离取出垂体并进行体外细胞培养,再用浓度为PCB-153:1、5、25、125μmol/L,p,p’-DDE:10、30、50、70μmol/L染毒48h后用MTT比色法测定它们在490nm的吸光度值;在单独作用的基础上,将PCB-153,p,p’-DDE两者按1+10、5+30、25+50、125+70μmol/L配制成为混合溶液,并对细胞染毒,在490nm处用MTT比色法测定它们的吸光度值。<br>　　结果:PCB-153、p,p’-DDE单独及其联合染毒作用于垂体细胞48h后,垂体细胞的吸光度值随着浓度的增加呈现出一种降低的趋势;PCB-153,p,p’-DDE单独作用,分别在125μmol/L,70μmol/L剂量组时明显低于溶剂对照组(P<0.05),25+50μmol/L联合染毒组也明显低于与溶剂对照组(P<0.05),其他剂量组没有差异。<br>　　结论:PCB-153、p,p’-DDE浓度分别高于25μmol/L,50μmol/L时,对垂体细胞的活力影响较大,可能会对细胞的正常形态、基本功能产生影响;PCB-153、p,p’-DDE联合染毒对垂体细胞活性的影响大于两者单独染毒的影响,这说明两种毒物联合染毒具有一定的协同作用。<br>　　第二部分:PCB-153、p,p’-DDE单独及联合作用对垂体细胞ASK-1、MKK7、JNK、c-jun基因表达情况的影响<br>　　目的:测定PCB-153、p,p’-DDE各剂量组单独及联合作用于大鼠垂体细胞后ASK-1、MKK7、JNK、c-jun基因的水平,探讨其对JNK/MAPK信号转导通路的影响。<br>　　方法:用Trizol提取垂体细胞总RNA,实时荧光定量PCR方法检测原代培养大鼠垂体细胞ASK-1、MKK7、JNK、c-jun的基因水平。<br>　　结果:PCB-153、p,p’-DDE单独及联合作用于大鼠垂体细胞48h后,ASK-1基因除两单独低剂量组外,均呈现出抑制状态;MKK7基因p,p’-DDE各剂量组与对照组比较均有统计学意义,PCB-153高剂量组有统计学意义,联合组与对照组和两毒物单独作用的各剂量组比较,结果均有统计学意义;随着各自染毒剂量组浓度的增加,JNK的mRNA表达水平也逐渐升高,JNK除p,p’-DDE低剂量组与对照组比较无统计学意义之外,其余各组均有显著性差异,且高剂量联合组与两单独组比较也有显著性差异;c-jun基因p,p’-DDE高剂量组与PCB-153及联合作用各剂量组,同对照组的比较均有统计学意义,且三个联合染毒组与相应剂量组的PCB-153、p,p’-DDE单独染毒时相比,垂体细胞中c-jun基因的表达均比单独染毒时有所升高,差异具有统计学意义。析因设计的方差分析显示除JNK低中剂量组外,其余各组均有明显的交互作用。<br>　　结论:ASK-1出现抑制状态说明可能是由于在该浓度毒物作用下,同时有抗凋亡的信号被代偿性激活,使得该基因表达呈现抑制状态。随着各自染毒剂量组浓度的增加MKK7,JNK,c-junmRNA表达水平逐渐升高,这表明PCB-153,p,p’-DDE及其联合作用可能激活了JNK信号转导通路。