摘要目的:<br> 研究HCMV UL148基因表达及其mRNA表达时相;在此基础上选取高表达时点,研究EGS对HCMV UL148基因表达的抑制作用。<br> 方法:<br> 1.将 HCMV接种于生长状态良好的人包皮成纤维细胞(HFF),通过观察细胞形态变化及应用多重PCR的方法鉴定HCMV的感染;<br> 2.根据HCMV基因时序表达(IE、E、LA),选择感染后的不同时间点(2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、96h)收获细胞总RNA,利用RT-PCR和荧光定量PCR方法鉴定UL148 mRNA的表达时相;<br> 3.合成以UL148 mRNA为靶基因的EGS(D-EGS)和无效的C-EGS,转染至感染HCMV的HFF细胞,同时在前一步的基础上,选择UL148基因的高表达时点,收集细胞总RNA,应用荧光定量PCR的方法研究EGS对HCMV UL148基因表达的抑制作用。<br> 结果:<br> 1. HCMV感染HFF细胞48h后细胞出现病变效应,经多重PCR鉴定,HCMV成功感染HFF细胞;<br> 2. HCMV UL148 mRNA于感染后12h开始表达,感染后24h表达量明显增加,在随后的48h、72h水平稳定表达,96h达到峰值;<br> 3.转染100nM EGS时,D-EGS能明显抑制细胞内病毒UL148 mRNA的表达,抑制效率可达72%±1.37%,而无效的C-EGS对UL148 mRNA的表达无明显影响。<br> 结论:<br> 1.初步鉴定UL148基因为HCMV基因的晚期基因;<br> 2.特异性EGS可有效抑制HCMV UL148基因的表达;<br> 3. EGS对HCMV UL148基因有明显的抑制作用,有望发展为新型抗HCMV反义核酸药物。
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