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摘要背景:<br>　　早期胃癌患者大多数无典型症状,基于报警症状的胃镜检查易于漏检。大规模筛查或许是提早检出胃癌的有效方法。现存的血中肿瘤标志物诊断胃癌的敏感度和特异度有限。我课题组前期研究就发现可以利用胃液荧光光谱第一荧光峰(P1FI)增强判别胃癌。因此,从胃液中分离出胃癌肿瘤标志物或许是筛查早期胃癌的有效方法。<br>　　方法:<br>　　本研究共分4部:<br>　　第一部分:招募97例接受胃镜检查患者的胃液,分两组:68例胃部良性病变(BL),与26例胃癌(GC)。采集胃液检测胃液中的P1FI以验证我课题组前期的结论。<br>　　第二部分:高效液相色谱仪(HPLC)分离胃液中的组分并探索理想分析条件。通过比较BL和GC组胃液的色谱图发现差异性色谱峰峰,再经过液相质谱联用仪(LC/MS)和核磁共振波谱仪(NMR)鉴定差异性色谱峰的化学成份。<br>　　第三部分:使用HPLC检测101例患者胃液中这些差异性物质的含量(芳香氨基酸, AAAs)。ROC曲线分析AAAs判别胃部恶性肿瘤的价值。采用剔除胃液中色氨酸后又恢复的方法,验证色氨酸就是参与引起P1FI增强主要原因。<br>　　第四部分:在两个独立的实验中分别检验胃液中P1FI和AAAs对早期胃癌(EGC)的判别价值。<br>　　结果:<br>　　第一部分:<br>　　BL(n=68)与GC(n=29)组胃液中P1FI的水平分别为:57.64±5.79和101.67±12.03。GC组胃液中P1FI较BL组的显著升高(P<0.001)。利用胃液中P1FI升高判别GC时,ROC曲线下面积(AUC)为0.703(95％置信区间 CI,0.580-0.826),结果与前期报道结论相吻合。<br>　　第二部分:<br>　　反向色谱柱对于分离胃液中各种组分效果较好。检测360 nm波长发射光(288 nm波长激发光)与205 nm波长吸光度可以很好的监测胃液中分离的组分。采用0.05%三氟乙酸与纯乙腈作为流动相线性梯度洗脱的方法分析胃液中各组分。通过比对BL与GC组色谱图,确定4个差异性色谱峰,对应的色谱柱保留时间分别为:8 min,12 min,16.5 min和33.5 min。在LC/MS分析中,这4个差异性色谱峰的单分子离子被确定为:m/z(mass to charge ratio,质核比)182, m/z166, m/z205和m/z265,同时检测它们的子离子谱。这些差异性色谱峰的化学成份被解析为:酪氨酸,苯丙氨酸,色氨酸和丁卡因。该解析结果在NMR分析中再次验证。AAAs标准品在色谱柱中的保留时间也与这些差异色谱峰相吻合。<br>　　第三部分:<br>　　P1FI,酪氨酸,苯丙氨酸,色氨酸和总蛋白含量分别如下:BL组(n=68),57.6±5.8,8.7±2.6μg/ml,8.8±2.1μg/ml,2.7±1.0μg/ml和1.8±0.2 mg/ml;GM(胃部恶性病变)组(n=33)109.3±11.7,54.9±11.0μg/ml,54.3±11.4μg/ml,19.4±4.7μg/ml和3.4±0.6 mg/ml。与BL组相比较,胃癌组患者胃液中的P1FI,酪氨酸,苯丙氨酸,色氨酸和总蛋白含量均显著升高(P均小于0.01)。使用AAAs升高判别GM的AUCs分别为:酪氨酸,0.838,苯丙氨酸,0.856和色氨酸,0.816(P均小于0.001)。其中,单独使用苯丙氨酸判别GM的敏感度和特异度为87.9%和79.4%。通过剔除胃液中色氨酸后又恢复的实验以检验色氨酸对P1FI的影响。结果显示胃液中P1FI在色氨酸剔除前后有显著变化(P<0.001)。<br>　　第四部分:<br>　　在评估胃液中AAAs诊断早期胃癌价值的实验部分,酪氨酸,苯丙氨酸和色氨酸的中位数(P25-P75)分别为:NGD(non-neoplastic gastric disease,胃部非瘤性病变)组3.8(1.7-7.5)μg/ml,5.3(2.3-9.9)μg/ml和1.0(0.4-2.8)μg/ml;EGC(Early gastric cancer,早期胃癌)组;19.4(5.8-72.4)μg/ml,24.6(11.5-73.7)μg/ml和8.3(2.1-28.0)μg/ml。EGC组胃液中的酪氨酸,苯丙氨酸和色氨酸水平较NGD组显著升高(NGD vs. EGC, P均小于0.0001)。使用AAAs水平升高判别早期胃癌的ROC分析显示, AUCs分别为:酪氨酸,0.790(95%CI0.703-0.877),苯丙氨酸,0.831(95%CI0.750-0.911)和色氨酸,0.819(95% CI0.739-0.900)。其中苯丙氨酸判别效果最佳,判别EGC的敏感度和特异度分别为:75.5%和81.4%。Logistic多元回归分析胃液中AAAs水平升高与早期胃癌的联系显示之间存在明显的联系(调整后β系数,1.801-4.414, P均小于0.001)。<br>　　在评估胃液中P1FI诊断早期胃癌价值的实验部分,AGC(advanced gastric cancer,进展期胃癌,92.1±10.7)与EGC(90.8±12.0)组胃液中 P1FI均显著高于NM-CNAG(normal mucosa or chronic non-atrophic gastritis,正常粘膜或慢性萎缩性胃炎)组(55.7±7.5)(AGC vs. NM-CNAG, P=0.006;EGC vs. NM-CNAG, P=0.015)。利用P1FI升高判别AGC或EGC的AUCs分别为0.681(95% CI0.553–0.810, P=0.010)与0.655(95% CI0.522–0.787, P=0.028)。<br>　　结论:<br>　　胃液中酪氨酸,苯丙氨酸和色氨酸水平从胃癌发生的早期就开始出现升高,可能是胃癌发生的早期事件。因此,胃液中酪氨酸,苯丙氨酸与色氨酸可以用作判别早期胃癌的标志物。胃液分析将会是一种有效,经济且简便的大规模筛检早期胃癌的检测方法。色氨酸对于胃癌患者胃液P1FI增强起主要作用。利用胃液中P1FI的增强也能检出早期胃癌,也可作为一项新的早期胃癌筛查工具。