检索历史 清除

摘要背景<br>　　树突状细胞（Dendriticcells,DCs）对辅助性T细胞17（Thelpcell17,Th17）/调节性T细胞（RegulatoryTcell,Treg）平衡的调控是免疫学研究中目前最为活跃的研究领域之一。Treg和新近发现的Th17是机体存在的两种不同于Th1和Th2的CD4+T细胞新亚型。Thl7细胞介导炎症反应，Treg细胞维持免疫耐受，机体处于正常状态下二者保持平衡。新近研究发现，在诸如类风湿关节炎（Rheumatoidarthritis,RA）、系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus,SLE）等自身免疫性疾病中存在Th17/Treg细胞失衡，进而诱导异常免疫应答[1]。位于免疫调节上游的机体最强的抗原提呈细胞——树突状细胞（Dendriticcells,DCs）对于上述免疫平衡起到了关键的调控作用[2]。改变病情抗风湿药（diseasemodifyinganti-rheumaticdrugs,DMARDs）的联合使用是治疗自身免疫性疾病的重要策略。甲氨蝶呤（Methotrexate,MTX）等DMARDs药物对树突状细胞调控Th17/Treg免疫平衡的影响国内外尚未见报道。通过10余年的临床与基础研究，我们已证实周期特异性药物MTX与周期非特异性药物环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）联合治疗类风湿关节炎具有协同效应。鉴于此，本课题从树突状细胞的角度进行协同机制的研究，探讨MTX联合CTX是否通过影响DC功能，最终重建Th17/Treg免疫平衡。<br>　　目的<br>　　1.研究单用MTX、单用CTX以及MTX联合CTX对DC成熟度的影响；<br>　　2.研究各组DC成熟度与DC刺激T细胞增殖能力的相关性；<br>　　3.初步探讨MTX联合CTX作用下，DC对Th17/Treg细胞平衡调控作用的影响。<br>　　方法<br>　　建立雄性C57小鼠的卵清蛋白（ovalbumin,OVA）致敏模型，随机分为OVA模型对照组、MTX组（3.03mg.kg-1.w-1）、CTX组（80.88mg.kg-1.3w-1）及MTX联合CTX组（MTX3.03mg.kg-1.w-1，CTX80.88mg.kg-1.3w-1）。OVA免疫后2d开始给药，共9周，于0、3、6、9周4个时点进行实验。采集各组小鼠骨髓，诱导培养DC，流式细胞仪检测各组DC表面分子（CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅱ）的表达；各组DC与同种异体正常小鼠CD4+T细胞共培养，3H-TdR检测T细胞增殖；进一步分析MTX联合CTX作用下的DC与Th17/Treg细胞水平的相关性。<br>　　结果<br>　　1.给药前，检测空白对照组与OVA组DC表面分子（CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅱ）的表达，后者表达升高，差异具有统计学意义（P<0.05）；<br>　　2.随着给药时间的延长，DC表面分子（CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅱ）的表达在各给药组中均呈下降趋势（P<0.05）；<br>　　3.MTX联合CTX治疗组表面分子的表达下降最明显。第9周，联合组与OVA组及单药组比较，表面分子表达差异具有统计学意义（P<0.05），单药组与OVA组比较差异具有统计学意义（P<0.05），单药组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）；<br>　　4.第9周各组DC与同种异体CD4+T细胞共培养，检测T淋巴细胞增殖，结果显示：与单纯T细胞对照组比较，OVA组、MTX组及CTX组T细胞增殖升高，差异有统计学意义（P<0.05），联合组T细胞增殖无显著差异（t=0.767,P=0.461）；与OVA模型对照组比较，各给药组T细胞增殖均下降，差异有统计学意义（P<0.05）；各给药组间比较，联合组较MTX或CTX单药组增殖下降，差异有统计学意义（t=6.998,P=0.012;t=2.703,P=0.035），单药组间差异无统计学意义（P>0.05）；<br>　　5.MTX联合CTX组在0、3、6、9周各表面分子（CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅱ）的表达与相对应的Th17/Treg细胞比值呈正相关（分别为：r=0.862，P<0.001；r=0.855，P<0.001；r=0.865，P<0.001；r=0.860，P<0.001）。<br>　　结论<br>　　1.DC成熟程度与DC刺激T细胞增殖的能力平行；<br>　　2.DC成熟程度升高，Th17炎性反应活跃；相反，DC成熟程度降低，Treg免疫抑制增强。各用药组均可抑制DC成熟，进而Th17/Treg比值降低，MTX联合CTX对其影响最为显著；<br>　　3.MTX联合CTX明显抑制DC功能，最终重建Th17/Treg免疫平衡。本研究揭示了树突状细胞调控Th17/Treg免疫平衡可能是MTX联合CTX治疗自身免疫性疾病的新的作用机制和治疗靶点。