换一批摘要黄曲霉毒素（Aflatoxin，AFT）主要是由黄曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）产生的毒性极强的次生代谢产物，黄曲霉毒素是一类结构类似的化合物的总称。在黄曲霉毒素家族中，常见的有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1和M2等。早在1988年黄曲霉毒素B1被国际肿瘤研究机构（IARC）定为一级致癌物。传统的检测方法不但耗时耗力，成本偏高，而且还需要专业技术人员对分析仪器进行操作。采用免疫化学分析法进行检测则可以克服以上缺点。本文旨在筛选出能分泌抗AFB1的高亲和力的单克隆抗体细胞株，为建立免疫化学检测方法打下基础。<br> 首先用碳二亚胺法（EDC）构建了两种完全抗原AFB1-BSA和AFB1-OVA，其中AFB1-BSA作为免疫原免疫两只8周龄BALB/C雌性小鼠四次，AFB1-OVA作为包被原包被酶标板，iELISA法测定免疫小鼠血清效价。加强免疫后，两只小鼠的效价分别达到了128000和32000。采用PEG（4000）法将SP2/0骨髓瘤细胞和免疫小鼠脾脏细胞进行融合，HAT筛选培养基筛选培养，经过3~4轮筛选得到三株能稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株：1B7、5A8、5B8。其中，1B7和5A8细胞株分泌的单克隆抗体为IgM亚型，5B8细胞株分泌的抗体为IgG1亚型。为便于后期纯化，本次实验采用5B8细胞株进行后续实验。经测定，5B8细胞株分泌的单克隆抗体效价达到20,0000，亲和力为7.96×108。将该细胞株进行扩大培养并注射到13周龄雌性Balb/c小鼠腹腔中，一周后取腹水，采用辛酸-硫酸铵法纯化腹水，经SDS-PAGE检测可以看到明显的重链和轻链条带，证明单克隆抗体纯化成功。
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