检索历史 清除

摘要牙髓疾病治疗中活髓保存治疗是最符合生物学观点的方法,在其治疗中盖髓剂的作用至关重要,因此,盖髓剂的不断改进非常重要[1-2]。在目前所用的众多盖髓材料中,骨形态发生蛋白(BoneMorphogeneticProtein,BMP)是一直普遍关注的材料之一,尤其是BMP2因其与牙本质形成和牙齿发育形成关系最为密切而备受关注[3-4]。有报道认为BMP2用做盖髓治疗,短时期内便可形成大量修复性牙本质封闭露髓孔,有利于牙髓的恢复[5]。但是当BMP2单独在体内应用时,很快就会被稀释或是被蛋白酶破坏,对牙髓细胞的作用时间短,不能有效的发挥其应有的生物性能;而且不能为牙本质形成提供支架,使其在临床应用中受到很大的限制。<br>　　近年来,随着以生物可降解聚合材料为载体制备微球技术的发展,对蛋白和多肽类运载系统的研究越来越多。其中聚乳酸-羟基乙酸共聚物〔poly(lactic-co-glycolicacid),PLGA〕因其生物相容性较好、可生物降解、无毒性;材料本身及其降解产物均对多肽类、蛋白等无明显的不良反应,而得到美国FDA的批准用于临床。以PLGA为载体包载BMP2制备缓释微球可以解决BMP2在应用时的不足,既能起到缓释作用;又可以保护相关因子的活性。本研究以牛血清白蛋白(BovineSerumAlbumin,BSA)为模型蛋白,PLGA为载体材料,采用W/O/W复乳溶剂挥发法制备BSA-PLGA微球;通过改变影响微球制备的相关因素,结合对微球包封率,24h突释量和表观形态的观察,得出在BSA投药量为10mg,外水相PVA浓度为10g/L,NaCl浓度为50g/L,复乳的匀质速度为10000r/min时制备的微球24h突释量小,微球形态圆整粒径均匀,表面光滑,无粘连。<br>　　实验二用实验一探索出的微球优化制备条件制备出rhBMP2-PLGA缓释微球,通过扫描电镜观察微球的表观形态并用马尔文激光粒度分析仪测定其粒径,通过ELISA法测定微球的包封率、载药量及体外释放第1d,3d,7d,14d,28d微球释放量。结果表明:优化工艺下制备的rhBMP2-PLGA微球冻干后呈白色粉末状,无塌陷现象;微球形态圆整均匀,表面光滑,无粘连;微球粒径分布呈正态分布,分布范围集中,大部分微球粒径分布在3um~4um之间。rhBMP2-PLGA微球的包封率72.5％±4.17%,微球的载药率为0.38%±0.24%。rhBMP2-PLGA缓释微球体外释放1d时载有rhBMP2的微球释放量为19.36%±1.83%,表现为突释性,这主要是由于微球表面的药物释放所致,随后释放比较缓慢,但累计释放量持续增加,到28d时达到52.76%±3.7%。采用W/O/W复乳溶剂挥发法能够制备出粒径适宜,形态均匀完整的rhBMP2-PLGA缓释微球。rhBMP2-PLGA微球具有良好的缓释作用和生物活性,能够长时间的缓慢释放生长因子,是一种理想的生长因子载体和缓释系统。<br>　　实验三以2条健康比格犬为实验对象,选取42颗牙齿,将42颗牙按随机数字表法随机分成7组(rhBMP2组,rhBMP2-PLGA微球组,胶原组,牙科专用抗生素组,抗生素﹢rhBMP2-PLGA微球混合组,胶原﹢rhBMP2-PLGA微球混合组,空白对照组),每组6颗牙。在实验牙的咬合面机械暴露牙髓1mm,并经过处理后将材料覆盖在露髓处,三个月后用MicroCT观察新形成的牙本质。结果表明:单纯使用rhBMP2可以观察到有完整的牙本质钙化桥生成,但量相对于其他组来说较少;单纯使用胶原也可生成完整的牙本质桥,表明胶原可以诱导牙髓细胞的分化和牙本质的生成;单独使用牙科专用抗生素时,生成牙本质的效果并不佳,说明抗生素对牙髓细胞无诱导作用;rhBMP2-PLGA单独用于盖髓时虽然没有复合牙科专用抗生素或胶原时生成的牙本质桥厚,但相对于单纯使用胶原生成的牙本质桥较厚。HE染色切片结果显示rhBMP2组、rhBMP2-PLGA组和胶原组的牙本质桥以骨样牙本质为主;而抗生素和rhBMP2-PLGA混合组与胶原和rhBMP2-PLGA混合组的牙本质桥以管样牙本质为主。所以复合牙科专用抗生素和rhBMP2-PLGA进行盖髓术后对牙髓细胞的诱导分化作用较其它组强,在相同时间内形成较厚且完整牙本质桥,具有良好的盖髓效果,为其用于临床提供可行性。