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摘要研究背景:<br>　　淋巴瘤(Lymphoma)是一种淋巴细胞克隆性增生的淋巴造血系统的恶性肿瘤,主要发生于淋巴结,但也可发生于结外器官,如肺、胃、肠、皮肤、生殖器官、骨、骨髓及脑等。淋巴瘤可分为霍奇金淋巴瘤及非霍奇金淋巴瘤两类。近年来,恶性淋巴瘤的发病率呈上升趋势,其中B细胞淋巴瘤占大多数。此外,大量研究发现淋巴瘤的发生、发展、预后及生物学行为与细胞凋亡紊乱密切相关。细胞凋亡受凋亡相关基因控制,目前已经知道与恶性淋巴瘤相关的凋亡基因有Survivin、Caspase等。<br>　　TF-1细胞凋亡相关基因19(TF-1 cell apoptosis-related gene19,TFAR19)是由北京大学人类疾病基因中心从人白血病细胞株 TF-1细胞中克隆到的一种重要凋亡相关新基因,国际人类基因命名委员会将其命名为PDCD5(programmed cell death5)。PDCD5定位于染色体19q12-q13.1,全长基因约6kb,由5个内含子及6个外含子组成,cDNA全长为590bp。实验表明 PDCD5是一个表达广泛、进化保守的重要凋亡正调控基因,该蛋白不仅在凋亡过程中表达增加,而且在凋亡早期出现明显的核转位现象,因而PDCD5可能作为一种新的早期凋亡的标志。由于PDCD5可能通过减少Survivin蛋白及增加Caspase活性来参与细胞凋亡调控过程,因此其表达异常与肿瘤的形成及发展进程常密切相关。据文献报道,PDCD5在白血病、肝癌、胃癌、乳腺癌、子宫颈癌等多种肿瘤细胞中存在异常表达。但在恶性淋巴瘤细胞株中PDCD5的表达如何尚不清楚。<br>　　目的:<br>　　研究人B细胞淋巴瘤细胞系SU细胞上清、SU/DXM细胞上清及使用不同浓度的DXM、VP-16、L-Asp及ADM诱导后的SU细胞上清中PDCD5的表达情况。<br>　　研究方法:<br>　　第一章、人B细胞淋巴瘤细胞系SU细胞的生物学特性<br>　　显微镜下观察SU细胞的细胞形态、生长状态;细胞计数法绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞表面标记和分析细胞周期分布;<br>　　第二章、SU/DXM细胞的生物学特性<br>　　地塞米松体外诱导SU细胞,并于显微镜下观察SU/DXM细胞的细胞形态、生长状态;细胞计数法绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞表面标记和分析细胞周期分布;MTT法分析耐药谱及IC50值。<br>　　第三章、PDCD5在SU细胞和SU/DXM细胞中的表达<br>　　提取SU细胞和SU/DXM细胞上清,采用PDCD5酶联免疫吸附测定试剂盒检测上述两种细胞上清中PDCD5的表达情况。<br>　　第四章、PDCD5在被不同浓度的多种化疗药物诱导后SU细胞上清中的表达<br>　　使用不同浓度的DXM、VP-16、L-Asp及ADM诱导处于对数期生长的SU细胞,并提取被诱导后的SU细胞上清,用PDCD5酶联免疫吸附测定试剂盒检测上清中PDCD5的表达情况。<br>　　结果:<br>　　第一章、人B细胞淋巴瘤细胞系SU细胞的生物学特性<br>　　1.SU细胞的细胞形态:SU细胞培养液清亮,细胞呈悬浮生长,圆形,细胞体积较大,透光性好。<br>　　2.SU细胞的生长状态:根据细胞计数法绘制细胞生存曲线。细胞周期检测比例如下:G0/G1期细胞为43.6％、S期细胞为48.5%、G2/M细胞为7.97%。不同细胞周期的SU细胞生长状态不同。此外,SU细胞高表达B细胞的相关表面标记,为B细胞系。<br>　　第二章、SU/DXM细胞的生物学特性<br>　　1.SU细胞经DXM诱导成为多药耐药的SU/DXM细胞。SU/DXM细胞的细胞形态和细胞生长状态与SU细胞没有明显差异。SU/DXM细胞仍为圆形,悬浮生长,胞体大小无变化,但细胞核中可见少许空泡。<br>　　2.流式细胞仪检测细胞周期比例如下:G0/G1期50.9%,S期35.3%,G2/M期13.8%。SU/DXM细胞仍高表达B细胞的相关表面标记,为B细胞系。<br>　　3.应用MTT法检测SU/DXM细胞对DXM、Vp-16、ADM和L-ASP的耐药指数分别为SU细胞的8.68倍、1.37倍、3.92倍和3.56倍。<br>　　第三章、PDCD5在SU细胞和SU/DXM细胞中的表达<br>　　利用酶联免疫吸附法检测SU细胞和SU/DXM细胞上清中PDCD5蛋白水平。SU/DXM细胞上清组中PDCD5蛋白的表达量明显低于SU细胞上清组,分别为(10.67±1.48)ng/ml和(19.74±2.99)ng/ml,差异有统计学意义(t=8.504,P<0.05)。<br>　　第四章、PDCD5在被不同浓度的多种化疗药物诱导后SU细胞上清中的表达<br>　　分别应用不同浓度的DXM、Vp-16、ADM和L-ASP诱导SU细胞,取共培养上清检测发现,诱导后SU细胞上清中有PDCD5蛋白表达,且DXM、Vp-16的浓度与PDCD5表达水平呈正相关关系。<br>　　结论:<br>　　1.DXM长期体外诱导SU细胞可使其发生MDR。<br>　　2.PDCD5蛋白在SU/DXM细胞上清中表达明显低于SU细胞上清。<br>　　3.不同浓度化疗药物诱导后SU细胞上清中均存在PDCD5蛋白表达,且DXM、Vp-16的浓度与PDCD5表达水平呈正相关关系。