换一批
换一批摘要目的:<br> 前期研究已证实UL148基因有mRNA表达,并对其所编码的蛋白质做了初步预测,本研究将进一步研究UL148mRNA的翻译情况,获得UL148基因的蛋白质,验证前期研究对其蛋白质的预测,进一步探讨其在致病机制中的可能功能,为UL148蛋白功能的研究建立基础。<br> 方法:<br> 1.培养人包皮成纤维细胞(HFF);<br> 2.人巨细胞病毒(HCMV)感染生长状态良好的人包皮成纤维细胞(HFF);<br> 3.感染人巨细胞病毒(HCMV)的人包皮成纤维细胞(HFF)提取总RNA;<br> 4.提取的总RNA行逆转录PCR,以得到的cDNA为模板PCR获取目的基因UL148全长;<br> 5.目的基因UL148全长与表达载体pET32a酶切后连接,构建重组UL148蛋白表达质粒;<br> 6.重组质粒转化至感受态大肠杆菌DH5α;<br> 7.筛选阳性克隆;<br> 8.挑取阳性克隆抽提质粒双酶切及测序鉴定;<br> 9.诱导阳性克隆大肠杆菌表达融合蛋白;<br> 10.总蛋白的SDS-PAGE分析。<br> 结果:<br> 成功从人巨细胞病毒(HCMV)感染的人包皮成纤维细胞(HFF)中抽提出总RNA,以逆转录PCR合成的cDNA为模板,PCR获得UL148基因全长。UL148基因与pET32a载体连接后转化细菌,获得阳性克隆,抽提重组质粒双酶切及测序鉴定成功。成功诱导表达出UL148蛋白。<br> 结论:<br> UL148基因有蛋白质表达,这为制备UL148蛋白抗体提供了前提条件,也为进一步研究UL148基因的蛋白质功能奠定了基础,同时开阔了人巨细胞病毒疫苗研究的方向。
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