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TRAIL影响人肺腺癌紫杉醇耐药细胞株对紫杉醇敏感性的研究

摘要目的:<br>  探索TRAIL干预后人肺腺癌紫杉醇耐药株对紫杉醇敏感性的变化及其可能机制。<br>  方法:<br>  1.建立并鉴定人肺腺癌紫杉醇耐药株:用含低浓度紫杉醇培养液持续培养人肺腺癌A549细胞株,逐渐增加剂量诱导建立耐药亚株A549/Taxol-R。用RT-PCR方法检测细胞耐药相关基因mRNA的表达,MTT法检测药物半数抑制浓度(IC50),判断细胞对药物敏感性。<br>  2.检测TRAIL和紫杉醇干预对A549/Taxol-R体外增殖和凋亡的影响:TRAIL和紫杉醇单独或联合干预A549/Taxol-R后,用MTT法检测药物半数抑制浓度(IC50),流式细胞仪检测细胞凋亡率变化。<br>  3.检测TRAIL和紫杉醇干预对A549/Taxol-R凋亡相关基因的表达情况影响:用TRAIL和紫杉醇单独或联合干预后,用WesternBlot检测Caspase-3活性裂解片段表达,用RT-PCR检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2mRNA的表达情况。<br>  结果:<br>  1.成功诱导培养了人肺腺癌A549细胞的紫杉醇耐药株A549/Taxol-R。相比其亲代细胞,A549/Taxol-R对紫杉醇的敏感性明显降低,同时其MDR1基因呈高表达。<br>  2.MTT结果显示:TRAIL和紫杉醇联合使用对A549/Taxol-R细胞的生长抑制率超过两者单独使用(P<0.05),两药具有协同作用。流式细胞细胞仪结果显示:TRAIL和紫杉醇联合使用对A549/Taxol-R细胞的凋亡率超过两者单独使用。<br>  3.WesternBlot和RT-PCR显示:TRAIL通过Caspase-3途径诱导A549/Taxol-R凋亡。凋亡相关基因Bax和Bcl-2参与调节其凋亡。<br>  结论:<br>  1.TRAIL在体外具有提高人肺腺癌A549细胞株的MDR亚株A549/Taxol-R细胞对紫杉醇的敏感性的作用;<br>  2.TRAIL可能是通过促进肿瘤细胞凋亡来提高人肺腺癌A549细胞株的MDR亚株A549/Taxol-R细胞对紫杉醇的敏感性,机制与其促进Bax的表达、下调Bcl-2的表达,从而上调caspase-3的表达有关。

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