摘要目的<br> 研究COX-2 shRNA对大鼠HSC apoA1、apoE、LDL-R表达的影响。<br> 方法<br> 采用带不同 COX-2shRNA片段的荧光质粒,通过脂质体 LiplofectamineTM2000转染大鼠HSC,荧光显微镜下评估细胞的质粒转染率。实验分为五组:即COX-2shRNA1转染组、COX-2shRNA2转染组、COX-2shRNA3转染组、空载体转染组、空白对照组。利用RT-PCR技术检测各组在24h、48h和72h后对apoA1、apoE、LDL-R mRNA表达的影响;同时应用免疫细胞化学法检测各组在48h、72h后 apoA1、 apoE、LDL-R的蛋白表达变化。<br> 结果<br> 1. HSC可以表达apoA1、apoE、LDL-R,其中LDL-R主要分布于HSC的细胞膜,其余均分布于胞浆中。<br> 2.RT-PCR结果显示:COX-2shRNA1、COX-2shRNA2、COX-2shRNA3均能沉默大鼠HSC apoA1、apoE mRNA的表达,增强LDL-R mRNA的表达,以COX-2shRNA1组的各时间点及各片段组72h后的作用更明显。<br> 3.通过免疫细胞化学法检测示:COX-2shRNA1-3三条序列均能沉默大鼠HSC apoA1、apoE的蛋白表达,增强LDL-R的蛋白表达,COX-2shRNA1组的各时间点及各片段组72h后的作用更明显。<br> 结论<br> 1.不同片段的COX-2shRNA均可下调活化HSC apoA1、apoE及增强其LDL-R的基因和蛋白表达。有干预HSC脂质代谢的作用,使HSC由去脂向储脂转变的趋势。<br> 2.COX-2shRNA1对大鼠HSC apoA1、apoE、LDL-R mRNA和蛋白的表达调控作用较明显。
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