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系统性红斑狼疮患者Ets-1表达及其调控微小RNAs的研究

摘要目的:<br>  检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中 Ets-1及其相关微小RNAs(miR-326、miR-155、miR-221、miR-222)的表达水平,分析其与狼疮活动指标和实验室指标(抗核抗体、血沉、C-反应蛋白、免疫球蛋白等)的相关性,探讨其在SLE发病机制中的作用。<br>  方法:<br>  收集安徽省立医院风湿免疫科门诊及住院部SLE患者50例,均符合1997年美国风湿病学会分类诊断标准,采用SLEDAI判断疾病活动度(≥5分为活动组,<5分为稳定组),其中SLE活动组30例(男性3例,女性27例),SLE稳定组20例(男性3例,女性17例)。健康对照组为20名健康志愿者,均无自身免疫病史。SLE患者和健康志愿者之间性别、年龄差异均无统计学意义。采集清晨空腹肘静脉EDTA抗凝血10ml。<br>  以Ets-1为靶基因,利用生物信息学方法(miRanda、TargetScan和PicTar软件)筛选出相关miRNAs(miR-326、miR-155、miR-221、miR-222)。将EDTA抗凝血采用密度梯度离心法提取 PBMCs,应用 Trizol提取 RNA,利用 PrimeScript和All-in-One miRNA逆转录试剂盒分别得到相应的cDNA;应用实时荧光定量PCR技术,根据 SYBR Green PCR和All-in-One miRNA qPCR试剂盒检测 Ets-1及miRNAs表达水平,并与患者血白细胞数、淋巴细胞百分比、血小板数、补体(C3和C4)、免疫球蛋白、ANA、ENA等资料进行相关分析。<br>  结果:<br>  ① SLE活动组和稳定组Ets-1表达水平[0.54(0.37~0.66)和0.50(0.35~0.71)]与健康对照组[0.74(0.64~1.14)]相比均显著减低(Z=-3.525,P<0.01;Z=-3.273,P<0.01);<br>  ② SLE活动组miR-326、miR-155、miR-221、miR-222表达水平比SLE稳定组、健康对照组显著增高(P<0.05);<br>  ③ SLE组miRNAs与Ets-1之间无相关性(P>0.05);<br>  ④ SLE组Ets-1与SLEDAI之间无相关性(P>0.05);4种miRNAs与SLEDAI呈正相关(r=0.475,0.542,0.397,0.057;P<0.05);<br>  ⑤ SLE组Ets-1与抗核抗体呈负相关(r=-0.366,P<0.05);miR-155、miR-221、miR-222与抗核抗体呈正相关(r=0.363,0.371,0.371,P<0.05)。<br>  结论:<br>  SLE患者外周血PBMCs中Ets-1表达降低,其可能与SLE发病相关;miR-326、miR-155、miR-221、miR-222在SLE活动组表达升高,可能作为SLE疾病活动的生物学标志。

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