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摘要随着氧化应激在动脉粥样硬化、心肌缺血/再灌注损伤、心肌病、心力衰竭等多种心血管疾病(Cardiovascular disease,CVD)发生发展的作用及分子机制的日益明确,其在CVD的作用越来越受到国内外学者的广泛关注。而血管内皮细胞损伤与凋亡是 CVD的始动因素之一,当氧化应激的副产物活性氧攻击血管内皮细胞时,易产生多种有害物质妨碍蛋白质分子正常翻译,造成蛋白质无法保持应有的折叠结构而失活;过多的未折叠蛋白质在内质网内沉积,即启动内质网应激（Endoplasmic reticulum stress,ERS),当内质网无法处理这些蛋白时,即促使内皮细胞进入凋亡途径。因此,研究药物拮抗氧化应激引起的ERS损伤的作用,对CVD的防治具有重要的意义。<br>　　淫羊藿苷（Icarlin,ICA)是淫羊藿干燥茎叶中提取出的黄酮类物质,具有抗氧化损伤、保护内皮细胞,抗心肌缺血,防治心血管疾病的作用。ICA能够拮抗同型半胱氨酸（Homocysteine,HCY)诱导的内质网应激和高糖引起的氧化应激损伤,增加损伤的血管内皮细胞中超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD)活性,减少乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH)活性和丙二醛（Malondialdehyde,MDA)含量;同时,降低内质网应激的标志蛋白葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein,GRP78)的mRNA表达。提示 ICA对氧化应激损伤的血管内皮细胞保护作用可能与减轻 ERS损伤有关。但是,ICA对正常血管内皮细胞活力的影响,及对内质网应激的标志蛋白,如转录激活因子6(activaing transcription factor-6,ATF6)和真核起始因子2α(Eukaryotic initiation factor2α,eIF2α)的作用,未见报道。为了进一步探讨 ICA拮抗血管内皮细胞氧化应激损伤的作用及其与 ERS的关系,我们观察过氧化氢（Hydrogen peroxide,H2O2)处理的人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)后,ICA对细胞活力和凋亡的、相关酶学指标,及GRP78、ATF4、eIF2ɑ蛋白表达的影响。<br>　　第一部分 ICA对正常血管内皮细胞活力的影响<br>　　目的:观察不同浓度ICA,在不同时间对正常 HUVECs活力的影响。<br>　　方法:对50μM、75μM、100μM的ICA和溶解液(DMSO)处理正常 HUVECs,并于24 h、48 h、72h,采用CCK-8法检测细胞活力。<br>　　结果:浓度为50μM、75μM、100μM的ICA和溶解液(DMSO)干预正常 HUVECs后,分别在24 h、48 h、72 h测得的OD值,与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。<br>　　结论:50μM、75μM、100μM的ICA对正常 HUVECs活力无明显影响。<br>　　第二部分 ICA对 H2O2诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的拮抗作用<br>　　目的:观察ICA拮抗H2O2处理的HUVECs损伤后,细胞形态、凋亡及相关酶学指标的影响。<br>　　方法:随机将 HUVECs为5组:对照组、H2O2组及 H2O2+50μM ICA、H2O2+75μM ICA和H2O2+100μM ICA组。采用 CCK-8法检测不同实验组的细胞活力,MTT法测定细胞贴附能力,TUNEL法检测细胞凋亡,分光光度法和ELISA检测SOD、GSH-Px和LDH活性及 MDA含量。<br>　　结果:H2O2处理后,细胞活力和粘附能力减弱,而凋亡增加;不同浓度的ICA均可一定程度上,增加细胞活力和粘附能力和减轻凋亡,及提高SOD和GSH-Px的活性,降低 LDH活性和MDA含量;其中,H2O2+100μM ICA组较 H2O2组有显著性差异(P<0.01)。<br>　　结论:ICA可拮抗 H2O2诱导的对血管内皮细胞的损伤,且呈明显的量效关系,其中,ICA浓度为100μM时,拮抗作用最为明显。<br>　　第三部分 ERS在ICA拮抗血管内皮细胞氧化应激损伤中的作用<br>　　目的:探讨 ERS在 ICA拮抗 H2O2诱导的HUVECs氧化应激损伤中的作用。<br>　　方法:1.将 HUVECs分为3组:对照组、H2O2组、H2O2+100μM ICA组。采用 Western blotting检测 HUVECs的GRP78、ATF4、eIF2ɑ蛋白表达。2.将HUVECs分为4组:H2O2组、H2O2+ICA组、H2O2+ICA+4-PBA组、H2O2+4-PBA组;3.将HUVECs分为4组: H2O2组、H2O2+ICA组、H2O2+ICA+DTT组、H2O2+DTT组。分别采用 CCK-8法、Western blotting和分光光度法和ELISA检测细胞活力、SOD和GSH-Px活性及 GRP78、ATF4、eIF2ɑ蛋白表达。<br>　　结果:H2O2或 DTT可明显增加 GRP78、ATF4、eIF2ɑ蛋白的表达,减弱细胞活力(P<0.01)。而给予100μM ICA和4-PBA干预,则可显著抑制GRP78、ATF4、eIF2ɑ的蛋白表达,且增加细胞活力(P<0.01);如同时给予ICA和4-PBA时,这种抑制作用更加明显(P<0.01)。<br>　　结论:ICA可能通过抑制 GRP78、ATF4、eIF2ɑ的表达,拮抗氧化应激对血管内皮细胞的损伤。至于同时给予ICA和4-PBA干预后GRP78、ATF4、eIF2ɑ的蛋白表达比单用 ICA或4-PBA显著降低,且细胞活力明显增加,可能与ICA和4-PBA的叠加效应有关。