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摘要细胞珠蛋白(Cytoglobin,Cygb)是Kawada等在大鼠肝星状细胞中发现的一种六配位血红素球蛋白,分子量为21.4 kDa。目前研究表明Cygb具有过氧化物酶活性和清除氧自由基的功能,并能通过调控Cygb基因的表达抑制肝纤维化。但Cygb作为一种胞浆蛋白,且在细胞表面无Cygb受体的情况下,外源Cygb无法主动进出细胞,发挥其抗氧化、抗炎症及抗肝纤维化等生物学功能。本论文结合穿膜肽TAT的穿膜作用和Cygb的生物学功能,制备及探讨TAT-Cygb融合蛋白在促进皮肤创伤愈合及抗肝纤维化方面的作用。<br>　　首先,通过乳糖诱导表达E. coli BL21/pET22b-TAT-Cygb中的TAT-Cygb融合蛋白,经CM阳离子交换层析、S-100分子筛层析、G-25分子筛脱盐等分离纯化过程,以及SDS-PAGE、LC/MS和Western blot鉴定,得到纯度>95％、浓度为3.273 mg/mL、过氧化物酶比活力为(422.63±3.17)U/mg的TAT-Cygb,并通过免疫细胞化学鉴定TAT-Cygb的穿膜能力;其次,利用H2O2氧化应激损伤模型和超氧化物阴离子荧光探针证明TAT-Cygb对细胞的保护作用和治疗氧化损伤的作用,并能降低细胞内超氧化物阴离子的水平,而无穿膜能力的Cygb无法缓解已氧化损伤的细胞;再次,利用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型验证TAT-Cygb的抗炎作用,在大鼠全层皮肤切除的创伤愈合实验中,TAT-Cygb可发挥抗炎作用促进皮肤创伤愈合,并通过调节细胞内的氧化应激防止成纤维细胞过度增殖或迁移,从而有效减轻皮肤愈合后瘢痕修复区域的大小;最后,在抗小鼠肝纤维化实验中,高剂量的TAT-Cygb可逆转CCl4诱导的小鼠肝纤维化,与模型组相比,肝脏内胶原纤维含量明显减少,肝小叶结构恢复正常,肝功能指标和纤维化血清标志物等含量均趋于正常。<br>　　本论文首次利用TAT的穿膜能力介导Cygb进入胞内,并证明TAT-Cygb融合蛋白具有促进皮肤创伤愈合及抗肝纤维化的作用,为后续开展Cygb抗炎症、抗衰老、抗肝纤维化的应用研究奠定了科学基础。