人肠道病毒71型衣壳蛋白VP1、VP2、VP3、VP4的构建、表达及抗原性研究-论文-万方医学网

人肠道病毒71型衣壳蛋白VP1、VP2、VP3、VP4的构建、表达及抗原性研究

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摘要人肠道病毒71型(EV71)属于小RNA病毒科、肠道病毒属的成员，是手足口病的主要病原体。手足口病和中枢神经感染是EV71病毒感染引起的两大常见临床症状。目前针对EV71病毒感染的治疗还没有特异和高效的药物，也没有预防性疫苗上市。灭活疫苗的研究还处于Ⅰ期临床试验阶段；基因工程重组蛋白疫苗尚处于动物实验阶段，需要寻找好的有效抗原蛋白。因此，本论文在原核表达系统E.coli中高效表达了EV71四种衣壳蛋白：VP1、VP2、VP3、VP4，表达产物均以包涵体形式存在；包涵体经过纯化、复性后的SDS-PAGE电泳纯度平均达到90％以上。动物实验结果显示VP1、VP4蛋白具有良好的免疫原性，产生高抗体滴度；VP2、VP3无明显的免疫原性，没有检测到抗体滴度；仅VP1免疫血清具有中和活性。通过本论文实验，加深了对EV71四种衣壳蛋白的认识；证实了VP4因为没有产生中和抗体，不具有成为基因工程重组蛋白疫苗候选抗原的潜力。同时证实了原核表达的VP2、VP3抗原蛋白经过去变性剂初步复性后，与EV71病毒颗粒表面的VP2、VP3蛋白在空间构象上有差异，需要进一步深入研究；证实了VP1具有成为基因工程重组蛋白疫苗候选抗原的特性。这为今后EV71疫苗候选抗原的筛选提供了重要依据。