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摘要背景：<br>　　MicroRNAs（小分子RNA，miRNAs）是一类全长约为21~25个核苷酸的非编码单链小RNA分子，miRNA可以识别特定的靶mRNA，转录以后信使RNA可以调节基因的表达水平，从而参与调控细胞的生长、增殖、分化、凋亡等生命活动。内分泌系统最常见的恶性肿瘤为甲状腺癌，其在恶性肿瘤中约占3％，已跃居头颈部恶性肿瘤的首位，女性发病较多。近年来各国报道甲状腺癌发病率的增长多以PTC为主。由于PTC早期多无明显症状，常常导致患者就诊时已经有淋巴结转移或已侵犯周围器官和组织。因此，探索PTC有效的治疗靶点、寻找更安全有效的治疗途径一直是提高PTC生存率和生存质量所亟待解决的难题。<br>　　在本实验前期的研究中，应用高通量的 MicroRNA微阵列筛选不同分期的PTC组织和癌旁正常组织中差异表达的MicroRNA时发现，miR-146b-5p在早期和中晚期PTC组织中均呈明显高表达，同时随着肿瘤分期的增加，其表达水平有升高的趋势，提示其在PTC发生、发展和转移过程中起着重要作用。<br>　　MiR-146b位于10q24.32，与miR-146a具有高度的序列同源性。He及Sheu等通过基因芯片技术及RT-PCR方法研究发现miR-146b在PTC组织中过表达。Kim、Xing及Chou等发现miR-146b在BRAF基因突变组织中表达明显升高， BRAF基因突变与PTC的侵袭性有关，这可能是miR-146b在PTC中过表达的一个分子机制。但目前尚未有关于miRNA-146b-5p与PTC细胞生物学影响及相关机制的相关报道，通过本课题的研究，可望获得miR-146b-5p对PTC的生物学行为影响的可靠证据，为确立miR-146b-5p作为PTC诊断和预后监测的生物学指标及治疗靶点奠定理论基础。<br>　　本次实验通过对甲状腺乳头状癌细胞TPC-1细胞株稳定转染使miR-146b-5p过表达，之后通过 CCK-8、划痕实验、transwell小室侵袭实验以及流式细胞仪检测对比转染前后PTC的增殖、凋亡、周期以及迁移、侵袭能力的变化。从而探讨miR-146b-5p过表达与甲状腺乳头状癌发展的关系及miR-146b-5p在甲状腺乳头状癌中的作用机制。<br>　　目的：<br>　　本实验通过慢病毒载体构建和慢病毒包装并通过慢病毒侵染试验，使得hsa-mir-146b-5p在甲状腺乳头状癌细胞 TPC-1细胞株中得到稳定高表达，这个试验为接下来进一步研究 miR-146b-5p过表达对甲状腺乳头状癌细胞 TPC-1增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学特性的影响打下坚实的基础。<br>　　方法：<br>　　1.慢性毒质粒的构建：<br>　　（1）构建miR-146b-5p过表达慢病毒质粒<br>　　（2）将过表达慢病毒质粒转染人甲状腺乳头状癌细胞 TPC-1，获取miR-146b-5p稳定过表达的细胞单克隆<br>　　2. miR-146b-5p对甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的影响<br>　　（1）观察 miR-146b-5p过表达对 TPC-1细胞增殖的影响：cck-8法检测miR-146b-5p过表达后可以明显促进TPC-1细胞的增殖，实验组和对照组的细胞数均有增加，但实验组的细胞增殖更加明显（P<0.05）。<br>　　（2）分析miR-146b-5p过表达对TPC-1细胞周期和凋亡的影响：通过流式细胞仪分析技术，可以看到实验组和对照组的细胞凋亡率之间有明显差异，实验组细胞凋亡率减少更为明显。<br>　　（3）研究miR-146b-5 p过表达对TPC-1细胞迁移能力的影响:划痕实验观察过表过miR-146b-5p的细胞，细胞迁移能力明显增强，transwell小室侵袭实验观察细胞的侵袭能力明显增强。<br>　　结果<br>　　（1）经慢病毒包装侵染将miR-146b-5p转染至甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中，细胞数都有所增加，但转染组的TPC-1细胞增殖的更加明显。（P<0.05）。<br>　　（2）CCK-8法和流式细胞仪技术检测转染miR-146b-5p基因后可以明显促进甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的增殖，实验组和对照组的TPC-1细胞数都有所增加，但实验组的TPC-1细胞数增加更加显著。（P<0.05）。<br>　　（3）流式细胞仪技术检测细胞凋亡率：实验组和空载组、对照组相比较细胞凋亡减少明显，差异显著。（P<0.05）。<br>　　（4）划痕实验观察转染miR-146b-5p后稳定转染miR-146b-5p中，24h、48h、72h迁移细胞数量均高于空载体组和对照组，转染miR-146b-5p后TPC-1细胞的迁移细胞明显增加（P<0.05）。transwell小室侵袭实验观察24h、48h、72h的穿膜细胞数，转染miR-146b-5p后TPC-1细胞的穿膜细胞数明显增多（P<0.05）。<br>　　结论：<br>　　经过慢病毒稳定转染miR-146b-5p后，转染后细胞经过CCK-8、划痕实验、以及流式细胞仪技术检测：TPC-1细胞的增殖得到促进，凋亡减少，迁移、侵袭能力明显增强。提示在 TPC-1细胞中 miR-146b-5p与甲状腺乳头状癌的发展相关，miR-146b-5p的过表达可以促进 TPC-1细胞的异常增殖，这种作用可能是miR-146b-5p通过调控某种抑制基因靶蛋白来实现的，抑制基因尚有待于进一步分析和研究。