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养金护肺汤对人肺癌A549细胞增殖、凋亡作用机制的研究

摘要目的:通过养金护肺汤对肺癌 A549细胞增殖抑制及凋亡诱导作用的实验研究,初步探讨该方治疗中晚期肺癌的作用机制,为养金护肺汤在临床的应用提供一定的科学依据。<br>  方法:通过体外实验观察养金护肺汤对肺癌细胞的增殖抑制及诱导凋亡的作用和影响。(1)噻唑蓝(MTT)显色法:观察10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL的养金护肺汤在24、48、72小时对人肺癌细胞株A549的生长抑制作用,并与临床治疗肺癌效果良好的常用化疗药物顺铂(0.19mg/mL)作用于人肺癌A549细胞株的生长抑制作用相对照;(2)AO/EB染色:观察人肺癌细胞株A549的细胞形态学的改变及对凋亡的影响;(3)Real-time Quantitative PCR Detecting System(RT-qPCR):针对养金护肺汤相关抑凋亡基因Bcl-2,抑癌基因P53表达的调控作用,在分子机制方面探讨其抗肿瘤作用。<br>  结果:(1)噻唑蓝(MTT)显色法,观察10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL的养金护肺汤在24、48、72小时对人肺癌细胞株A549的生长抑制作用,并与临床常用的化疗药物顺铂0.19mg/mL对人肺癌细胞株A549生长抑制作用相对照,结果提示实验最佳作用时间为48小时,实验48小时人肺癌A549细胞半数致死率浓度(IC50)为3.16mg/mL,从而选择与IC50值接近的2.5mg/mL作为实验的低浓度,确定中药高中低浓度为10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL;不同浓度的养金护肺汤作用于A549细胞24、48、72小时后,各组对A549细胞均有不同程度的抑制作用,抑制率随药物浓度的增加逐渐提高,其中10、5、2.5mg/mL组别与空白对照组相比均有显著性差异(P<0.01),与顺铂对照组相比无统计学意义(P>0.05),顺铂对照组与空白对照组相比有显著差异(P<0.01)。(2)形态学观察:养金护肺汤作用于肺A549细胞后,AO/EB染色提示中药组早期凋亡细胞与空白对照组相比较稍多,晚期凋亡细胞和死亡细胞数随中药剂量增高逐渐增多;(3)RT-qPCR:实验组中A549细胞中的Bcl-2基因表达有下调趋势、P53基因的表达水平有上升趋势,并与中药浓度呈一定的量效关系。实验组高、中、低不同药物浓度下Bcl-2、P53表达与空白对照组相比,均有显著差异,(P<0.01),与顺铂对照组相比无统计学意义(P>0.05),顺铂对照组与空白对照组相比有显著差异(P<0.01)。<br>  结论:本实验证实养金护肺汤具有抑制人肺癌A549细胞生长增殖、诱导其凋亡的作用。该方对人肺癌A549细胞的生长抑制作用随中药浓度增加逐渐增强;该方诱导凋亡的作用随中药给药浓度增高逐渐增强,其中抑凋亡基因 Bcl-2的表达随中药浓度增高逐渐下降,抑癌基因 P53表达随中药浓度增高逐渐上升。初步提示养金护肺汤对肺癌细胞的抑制作用可能是通过分子生物学通路调控细胞增殖、凋亡,从而影响肺癌的发生与转化。

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