摘要【目的】探讨线粒体分裂蛋白Drp1和转录后修饰蛋白SUMO2/3在D-半乳糖诱导的拟老化大鼠模型蜗核中的表达功能<br> 【方法】选取听功能正常的7周龄健康SD大鼠160只,雌雄不拘,随机分为两组,实验组和对照组。D-半乳糖实验组:每日颈背部皮下注射D-半乳糖(500mg/Kg)一次,连续8周;NS对照组:每日颈背部皮下注射0.9%生理盐水(10ml/Kg)一次,连续8周。分别于给药结束后0个月、6个月、12个月处死实验动物,留取蜗神经核组织。通过Western blot检测Drp1、SUMO2/3和细胞色素C在蜗核中的蛋白表达含量;Rt-PCR检测Drp1和SUMO2/3的基因表达情况;透射电子显微镜观察蜗核神经元线粒体超微结构变化;免疫组织化学定位和半定量细胞色素 C表达情况;动物处死前听性脑干反应(ABR)检测听阈。<br> 【结果】①Western blot结果显示:随着年龄增长,蜗核内Drp1和细胞色素C蛋白含量也在增加;Drp1和细胞色素C的蛋白含量在各时间点相比,D-半乳糖组明显高于NS对照组。而SUMO2/3蛋白含量随着年龄增长则明显下降,各时间点相比,D-半乳糖组也明显低于NS对照组。②RT-PCR结果显示:蜗核组织内Drp1的mRNA含量随着年龄增长和各时间点的对比都与蛋白质含量表达相一致;而随着年龄增长<br> SUMO2/3的mRNA含量在D-半乳糖组明显增加,NS对照组则无明显变化,各时间点SUMO2/3的mRNA含量则是D-半乳糖组明显高于NS对照组。③ABR听性脑干测听的听力结果显示:打药后12月龄和0月龄的大鼠相比,D-半乳糖组和NS对照组听阈都有所升高,而各时间点相比,D-半乳糖组和NS对照组听阈则无明显统计学差异。④透射电子显微镜结果显示:各时间点,D-半乳糖组和NS对照组相比,线粒体形态有所改变,数目增多,体积减小,肿胀,空泡化可见,随着年龄的增长细胞内出现脂褐素等。⑤免疫组织化学结果显示:细胞色素C主要表达于细胞质中,随着年龄的增加,细胞色素C表达阳性神经元增多,而在D-半乳糖实验组与NS对照组相比,阳性细胞数也明显增多。<br> 【结论】1.在D-半乳糖诱导的大鼠拟老化模型中,线粒体动力学异常可能参与了听觉中枢的老化过程2.线粒体分裂蛋白Drp1可能参与了蜗核神经元细胞凋亡3.SUMO2/3的蛋白后修饰可能对蜗核神经元的老化具有一定的保护作用。
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