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摘要目的：1、克隆家蝇抗真菌肽MAF-1（Musca domesticaantifungal peptide-1）的cDNA序列，推导MAF-1的全长氨基酸序列，并进行生物信息学分析。2、构建MAF-1的E.coli表达体系并检测表达产物的抗真菌活性。3、初步揭示MAF-1基因在家蝇内的时空表达模式。<br>　　方法：1、根据已知MAF-1的N端氨基酸序列设计简并引物，提取家蝇3龄幼虫的总RNA，采用RACE技术分别克隆MAF-1的3’端和5’端cDNA序列，进而拼接得到MAF-1的全长cDNA序列并对其进行生物信息学分析。2、根据所得MAF-1的cDNA序列设计引物，克隆MAF-1成熟肽部分的基因片段，用原核表达载体 pET-28a(+)，构建原核重组表达质粒，并转化至大肠杆菌BL21/DE感受态细胞中，将转化菌菌液用亲和层析柱纯化获得带His标签序列的重组MAF-1融合蛋白；用重组MAF-1融合蛋白制备大鼠多克隆抗体，进行Western Blotting鉴定；以白假丝酵母菌（ATCC10231）为指示菌检测表达产物的抗真菌活性。3、以GAPDH基因为内参基因，采用实时荧光定量PCR（Real Time PCR）技术检测实验室驯化家蝇、野生家蝇生活史各发育阶段中MAF-1基因的表达差异，家蝇3龄幼虫脂肪体、唾液腺、肠道和体壁中MAF-1的表达差异，以及热诱导前后不同时间的家蝇3龄幼虫中MAF-1基因表达水平的变化。<br>　　结果：1、MAF-1的编码cDNA序列全长537bp，翻译后为178个氨基酸残基组成的蛋白多肽。生物信息学分析结果显示，所得MAF-1蛋白序列具有一段信号肽，成熟肽部分的理论分子量为17184.2Da，等电点为5.37，与其实际检测的分子量17208.384Da，等电点4.96相近。同时，MAF-1是以α螺旋为主的线性蛋白，其序列中可能的一功能结构域位于第128至153位氨基酸残基处。另外，MAF-1序列中有2个蛋白激酶C磷酸化位点(Protein kinase Cphosphorylation site)、1个N端酰基化位点(N-myristoylation site)，多个蛋白相互作用位点。模建的MAF-1的三维空间结构图为以α螺旋为主要二级结构的线性蛋白。2、成功构建MAF-1原核重组表达质粒，并转化至大肠杆菌BL21/DE中，纯化得到带His标签序列的重组MAF-1融合蛋白；Western Blotting鉴定显示所得MAF-1融合蛋白具有免疫原性，可被用其制备的大鼠多克隆抗体识别；抗真菌活性检测结果显示，获得的重组MAF-1融合蛋白对白假丝酵母菌（ATCC10231）具有明显的抗真菌活性。3、MAF-1基因在家蝇内的时空表达模式研究结果显示，在实验室驯化家蝇及野生家蝇的卵、1龄幼虫、2龄幼虫、3龄幼虫、蛹和雌雄蝇各生长阶段中，MAF-1基因均有不同程度的表达。其中，驯化家蝇中MAF-1基因在1龄幼虫和2龄幼虫内的表达最高，其次是3龄幼虫。蛹、雄蝇内的表达与卵期相近，雌蝇内MAF-1的表达较卵期有所下调。野生家蝇中MAF-1的表达在1龄、2龄、3龄幼虫内均比卵期增强，其次是在蛹、雌蝇内的表达，而在雄蝇和卵内的表达相对最低。家蝇3龄幼虫经热诱导后，MAF-1基因在其体内的表达均有所上调。在热诱导后12h，家蝇3龄幼虫内的MAF-1基因表达水平最高，在热诱导后48小时，表达水平趋近于诱导前的表达水平，但MAF-1基因的表达与诱导后时间的长短并未显现出线性关系。在家蝇3龄幼虫的各主要组织中，唾液腺和脂肪体中的MAF-1基因表达水平明显比体壁及肠道高。<br>　　结论：1、家蝇独特的抗真菌肽MAF-1的cDNA全长序列为537bp，翻译后为178个氨基酸残基组成的蛋白多肽，是一全新的以α螺旋结构为主的线性昆虫抗真菌肽，GenBank的登录号为HM178948。2、成功构建了能够表达具有体外抗真菌活性的重组 MAF-1融合蛋白的大肠杆菌pET-28a(+)-MAF-1-BL21表达体系，证明了克隆的MAF-1cDNA序列及其生物信息学分析结果的正确性。3、初步揭示了MAF-1基因在家蝇体内的时空表达模式，推测MAF-1基因可能既是家蝇的免疫分子之一，也是家蝇幼虫发育有关的生理因子之一，并发现家蝇3龄幼虫的唾液腺可能在其免疫防御机制中具有重要作用。结果为进一步研究MAF-1的生物学活性、结构与功能关系等奠定了基础，同时也为MAF-1的获取提供了新的途径。