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摘要第一部分<br>　　目的：为筛选和鉴定参与口腔鳞癌发生、发展相关的生物标志物，本课题组前期采用基因表达谱芯片，筛选发现Transglutaminase3(TGM3)基因在口腔鳞癌组织中表达显著下调。本研究旨在验证TGM3在口腔鳞癌中的表达水平；探讨其表达下调的机制；分析TGM3对口腔鳞癌细胞增殖、克隆形成、凋亡和体内成瘤等生物学特点的影响；分析TGM3表达水平与口腔鳞癌临床病理、预后的关系。<br>　　方法：采用半定量RT-PCR、实时定量RT-PCR和蛋白印迹技术，分别在9例口腔鳞癌细胞系和53对口腔鳞癌组织样本中检测TGM3的转录和翻译水平；使用DNA去甲基化药物5-Aza-dC和组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA，处理口腔鳞癌细胞系后检测TGM3表达水平变化，通过亚硫酸氢盐测序分析口腔鳞癌细胞系以及口腔鳞癌组织样本中TGM3基因启动子区甲基化水平；在TGM3低表达的口腔鳞癌细胞中，过表达外源性TGM3后，分析其对口腔鳞癌细胞增殖、克隆形成、凋亡和裸鼠皮下成瘤能力的影响；采用免疫组织化学技术检测101例口腔鳞癌组织样本中TGM3蛋白表达水平，分析其表达与口腔鳞癌临床病理、预后的关系。<br>　　结果：TGM3的转录和翻译水平在口腔鳞癌细胞系及组织样本中表达显著下调；DNA去甲基化药物5-Aza-dC可以剂量依赖性地上调TGM3的表达，亚硫酸氢盐测序分析发现，口腔鳞癌细胞和组织样本中TGM3基因启动子区甲基化水平显著高于正常口腔黏膜细胞和配对的癌周正常组织；表达外源性TGM3可以显著抑制口腔鳞癌细胞的增殖和克隆形成，能诱导凋亡并抑制口腔鳞癌细胞的裸鼠皮下成瘤能力；TGM3蛋白在口腔鳞癌组织中的表达与病理分化呈正相关(P=0.0037)；TGM3高表达的口腔鳞癌患者生存率显著优于TGM3低表达的口腔鳞癌患者(P=0.0002)；多因素Cox回归分析显示，TGM3的表达水平可以作为判断口腔鳞癌患者预后的独立指标(HR,0.286;95％CI,0.103-0.796;P=0.016)。<br>　　结论:DNA甲基化导致了TGM3基因在口腔鳞癌中的表达下调；TGM3作为一个抑癌基因参与了口腔鳞癌的发生、发展；TGM3可以作为判断口腔鳞癌患者预后的候选生物标志物。<br>　　第二部分<br>　　目的：本课题组前期采用基因表达谱芯片筛选发现，Myelin and lymphocyte associated protein(MAL)基因在口腔鳞癌组织中表达显著下调，通过体内、外实验证实，MAL基因作为抑癌基因影响口腔鳞癌细胞的增殖、克隆形成、凋亡、侵袭和裸鼠皮下成瘤能力。本研究旨在通过构建MAL基因敲除鼠，在整体动物水平进一步研究MAL基因在口腔鳞癌发生、发展中的功能和作用。<br>　　方法：通过基因打靶、同源重组技术构建MAL基因敲除鼠；采用PCR技术在DNA水平鉴定 MAL小鼠的基因型；通过胚胎发育、个体发育表型分析、血液生化指标分析、各组织器官组织病理学分析比较MAL纯合子、杂合子和野生型小鼠可能存在的差异；采用不同剂量的4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitroquinoline-1-oxide,4-NQO)诱导MAL纯合子、杂合子和野生型小鼠口腔黏膜成瘤，分析比较MAL纯合子、杂合子和野生型小鼠在口腔黏膜病变发生率、发生时间、病变数量、病变进展速度和病变组织病理特征的差异。<br>　　结果：成功构建了MAL基因敲除鼠；完成了MAL基因敲除鼠的保种、繁殖、传代；鉴定了新繁殖出的233只MAL小鼠的基因型；MAL纯合子、杂合子和野生型小鼠在胚胎发育、个体发育、血常规、血液生化、各主要器官组织学结构未发现差异；暴露较小剂量4NQO（40μg/ml）诱导下，MAL纯合子小鼠发生口腔或食道黏膜的良性肿瘤或早期癌，而MAL杂合子、野生型小鼠经相同剂量和时间4NQO诱导，仅发生口腔黏膜上皮异常增生；暴露较大剂量4NQO（80μg/ml）诱导下，发现MAL纯合子小鼠发生口腔黏膜病变时间较杂合子、野生型小鼠发生口腔黏膜病变时间显著提前，MAL纯合子小鼠较杂合子、野生型小鼠口腔黏膜病变进展速度显著增快，MAL纯合子小鼠发生口腔黏膜病变数量较杂合子、野生型小鼠发生口腔黏膜病变数量显著增多，MAL纯合子小鼠口腔黏膜病变的病理程度较杂合子、野生型小鼠口腔黏膜病变的病理程度明显严重。<br>　　结论:MAL基因敲除鼠对化学致癌剂易感性增高；MAL基因是参与口腔鳞癌发生、发展的抑癌基因。