MV3恶性黑素瘤体外模型低温冻存与复苏的初步研究-论文-万方医学网

MV3恶性黑素瘤体外模型低温冻存与复苏的初步研究

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摘要目的:探讨MV3黑素瘤细胞接种至人去表皮的真皮(DED)体外构建皮肤恶性黑素瘤模型的低温冻存与复苏技术。<br>　　方法:对MV3黑素瘤细胞行HE染色，S100蛋白、HMB45和CK免疫组化染色;将MV3黑素瘤细胞接种于DED表面，采用液下培养和空气-液面培养相结合的方式培养15天体外构建恶性黑素瘤模型，用HE及免疫组化染色(S100蛋白、HMB45、CK)观察黑素瘤细胞在DED的侵袭和分布。用含10％DMSO的冻存液慢速冻存和快速复温体外恶性黑素瘤模型，并对从模型中复苏的细胞进行HE染色及S100蛋白、HMB45和CK免疫组化染色。<br>　　结果:MV3恶性黑素瘤细胞S100蛋白、HMB45和CK免疫组化染色阳性。体外模型的HE染色显示MV3黑素瘤细胞在DED表面呈带状分布，在凹陷处聚集成群，并形成大小不等灶、团，部分细胞突破基底膜侵入DED组织内，在皮肤附属器管壁内也有瘤细胞的聚集;组织中黑素瘤细胞S100蛋白、HMB45和CK阳性。经低温冻存复苏的体外模型可见MV3细胞从DED边缘爬出，细胞量陆续增多，并形成集落。体外模型复苏后爬出的细胞HE染色示形态学无改变， S100蛋白、HMB45及CK免疫组化染色均显示阳性。<br>　　结论:MV3黑素瘤细胞体外构建的恶性黑素瘤模型经冻存复苏前后细胞形态和表达的肿瘤相关抗原标记物无明显改变;可通过含10％DMSO的冻存液、慢速冻存和快速复温的方法保存MV3构建的体外恶性黑素瘤模型。