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摘要酸敏感离子通道(ASICs)是一类由胞外酸化所激活的阳离子通道，分为6种亚型，广泛分布于外周和中枢神经系统。近年来已有研究证明ASIC1a在疼痛、学习记忆等方面具有重要功能，同时，也涉及某些病理过程如癫痫、胶质母细胞瘤、缺血性脑中风等。<br>　　离子通道稳定表达细胞株结合钙荧光成像技术与全自动膜片钳技术无疑将加快调制剂的筛选周期。为此，我们构建了ASIC1a和ASIC3两种离子通道稳定表达细胞株。利用膜片钳技术检测电流密度以及利用倒置相差显微镜观察细胞绿色荧光表达强度的方式来检测细胞株的稳定性，结果显示，稳转细胞株表达离子通道的数目在统计学上未发生显著变化，且荧光强度也未发生显著改变，这证明两种离子通道稳转细胞株已经构建成功。<br>　　在ASIC1a稳转细胞株的基础上，我们从本实验室的有毒动物毒液中筛选了针对ASIC1a的调制剂。实验发现，从黄金巴拿马蜘蛛毒液分离得到的组分PPCV-21.8在不同条件下扮演着抑制剂或激活剂，因其含量低，并未能纯化到单一成分进行鉴定，但结合蜘蛛毒腺cDNA文库的数据分析，推测cDNA文库分析所得的氨基酸序列是PPCV-21.8发挥作用的关键成分。其氨基酸序列为ADCIPKWKACVNRHGDCCGGL ECWKRRRSFEVCVPKTPKT，包含40个氨基酸残基，3对二硫键。<br>　　PPCV-21.8可直接激活ASIC1通道。PPCV-21.8增强了ASIC1a对H+的亲和力，使ASIC1a在pH7.4时脱敏。5μM PPCV-21.8使ASIC1a稳态激活向碱性方向偏移了0.36个pH单位至7.07±0.059。其次，我们还研究了PPCV-21.8对其它ASICs亚型的作用效果，发现18μM PPCV-21.8对ASIC2a无影响;可激活ASIC3电流32.67±4.0％;强烈激活ASIC1b，EC50=1.4μM，同时可加快ASIC1b的开放(无PPCV-21.8时，ASIC1b的上升相τ=0.162±0.029 s，(n=5);在18μM PPCV-21.8作用下，τ=0.042±0.005 s，(n=5)，P＜0.01)，并显著延长通道的脱敏(无PPCV-21.8时，ASIC1b的衰退相τ=0.579±0.107 s，(n=5);在18μM PPCV-21.8作用下，衰退相τ=2.13±0.265 s，(n=5)， P＜0.01)。用15 nM PPCV-21.8长时间孵育(约200s)后，可抑制ASIC1a电流，抑制率达93.89±1.9％，60 nMPPCV-21.8对其它ASIC亚型无明显影响。最为重要的是，高浓度PPCV-21.8对电压门控钠通道的影响甚小，因此PPCV-21.8对人体具备较高的安全性。<br>　　综上所述，PPCV-21.8是一个对ASIC1a具有高活性和强选择性的抑制剂，可作为药物先导分子用于疼痛、中风等疾病的治疗且有助于ASICs结构与功能的研究，以便于我们进一步加深对ASICs与生理病理关系的了解和探究其作为疾病治疗的重要靶点的可能性。